抗寒基因ICE1 转入烟草研究.docVIP

精品论文 参考文献 抗寒基因ICE1 转入烟草研究 缪嘉航（安徽中烟芜湖卷烟厂 安徽芜湖241000） 　　【摘要】通过PCR 的方式从拟南芥中扩增得到ICEI 目的基因，将ICEI 基因连接到pMD18T 载体中，再采用双酶切的技术将AtICEI 基因连接到植物表达载体pCAMBIA1301 上构建pLC2015 植物表达载体，利用农杆菌介导的方式将Plc2015 载体转入烟草中，经过PCR 和抗寒性实验检测，结果表明ICEI 基因已成功转入烟草中，并具备一定的抗寒性。 　　【关键词】抗寒性；ICEI；转基因烟草【中图分类号】 Q812 【文献标号】 A 【文章编号】 2095-9753（2016）3-0239-02Abstract: Amplify from arabidopsis thaliana by means of PCR to get the target gene of ICEI, connect the ICEI gene to the carrierof pMD18T, use the double enzyme digestion technology to connect AtICEI gene to the plant expression vector of pCAMBIA1301 inorder to build the plant expression vector of pLC2015, and transform the carrier of pLC2015 into tobacco by way of agrobacteriummediatedtransformation. After the detection of PCR and cold resistance experiment, the result shows that ICEI genes have beensuccessfully transferred into tobacco and are of certain cold resistance.Key words: cold resistance; ICEI; transgenic tobacco 　　温度能够对植物的生长、发育、繁殖产生强烈的影响。低温可能会使植物无法存活而拥有抗寒性的植物则能在低温环境中正常的存活。每年都有大量因低温死亡的农作物，对全球的经济造成了巨大的损失。植物冷驯化是指长期处于低温环境中的植物会发生一系列特异性的突变来顺应环境，增强植物的抗冻能力。目前，植物冷驯化的分子调控机制方面的研究已经取得了丰富的成果。转录因子CBF/DREB1（C repeat binding factor/dehydration responsive elementbinding protein）会在低温环境中加快表达速度，促进下游大部分基因的表达，在植物冷驯化过程中发挥着关键作用。ICE1（inducer ofCBF expression 1）是转录因子CBF 的上游转录调节因子，能够和CBF 中MYC 顺式作用元件相互结合激活CBF3 基因，进而激活大量的下游基因表达。 　　本研究采用农杆菌介导将拟南芥的ICE1 基因转入到烟草中，期望在不影响烟草正常生长、发育的基础上，增强烟草的抵御低温的能力，并利用转基因技术培育具有抗寒能力的烟草打下坚实的基础。 　　1 材料和方法1.1 材料将拟南芥（Arabidopsis Columbia ecotype）的种子洗净，浸泡于75% 的乙醇中消毒5min，再用无菌水冲洗5 次，接种于1/2MS 分化培养基中培养，设置温度为25℃，光照强度为4000lx，光照12放置于组培室培养。将烟草（Nicotiana tobacum）种子取出，浸泡于75% 乙醇中消毒5 分钟，在置于0.1% 的升汞中消毒15min，灭菌水淋洗5 次，接种于1/2MS 分化培养基中，设置温度为25℃，光照强度为4000lx，光照12 放置于组培室培养。 　　1.2 方法1.2.1 获取AtICE1 基因从出苗10d 左右的拟南芥叶片中提取总RNA，并作为模板， 以Olig（dT）18 为引物进行反转录，然后取适量反转录获得的cDNA 为模板以ICE1f：5 prime; - C C A T G G T C A C G T G G A T C A T A C C A G C A T A C -C C T G C T - 3 prime; ( N c o I 酶切位点) 和I C E 1 r :5 prime; -CCATGGGTCTTGACGGAAACAATGGT-3 prime; (AcvI 酶切位点) 为正反引物，使用TaqDNA 聚合酶进行PCR