藻酸盐抗体的制备及其对铜绿假单胞菌生物被膜的影响研究.pdfVIP

藻酸盐抗体的制备及其对铜绿假单胞菌生物被膜的影响 柴 栋 王 睿 裴 斐 方 翼 解放军总医院临床药理药学研究室 北京 100853 摘要 目的 探讨藻酸盐抗体的制备 检定和对院内常见致病菌铜绿假单胞菌生物被膜 作用 方法 应用免疫方法制备藻酸盐抗血清 应用脾细胞-骨髓瘤细胞融合技术制备 藻酸盐单克隆抗体 应用扫描电镜观察细菌生物被膜形态变化 结果 建立了两株稳定 分泌高效价单克隆抗体细胞株 藻酸盐抗体可减少铜绿假单胞菌生物被膜藻酸盐 结论 藻酸盐抗体可中和细菌藻酸盐以防治铜绿假单胞菌生物被膜相关感染 关键词 藻酸盐 细菌生物被膜 院内感染 Abstract: Object: To prepare and identify the antibody-serum or monoclonal antibody of alginate, and investigate the role of antibody of alginate against bacteria biofilim(BBF) disease caused by pseudomonas aeruginosa in nosocomical infection. Method: antibody-serum of alginate was acquired by routine immunity method The spleen cell was obtained from BALB/C by programmed immunization , and then was fused with myeloma cell line SP2/0. The positive clones were obtained by ELISA method. SEM was used to observe the form of BBF. Result: two kinds of monoclonal antibody of alginate was obtained pseudomonas aeruginosa BBF alginate was decreased by antibody of alginate. Conclusion: The neutralization role of antibody of alginate is one of the mechanism that antibody of alginate prevents and cures pseudomonas aeruginosa BBF. Key words: alginate; bacteria biofilim nosomical disease 铜绿假单胞菌是院内感染最常见致病菌之一 因其易形成细菌生物被膜 常使感染 反复发作 迁延不愈 藻酸盐是粘液型铜绿假单胞菌分泌的细胞外多糖和主要粘附因子 [1] 是多层次BBF结构的主要成份 目前 关于藻酸盐在铜绿假单胞菌致病性方面的研究 是热点问题 国外研究多集中在藻酸盐合成与裂解的酶学调控方面 在免疫学调控方面 国外曾报道应用藻酸盐调理素抗体杀灭细菌的作用 本研究初步探讨藻酸盐抗体的制 备 检定及其在防治铜绿假单胞细菌生物被膜中的作用机制 1 材料 1.1 动物 大耳白家兔 解放军总医院动物中心提供 BALB/C 小鼠 雄性 六周龄 18 20g 中国医学科学院动物中心提供 小鼠骨髓瘤细胞SP2/0 由中国医学科 学院基础研究所细胞生物室常规传代 1.2 菌株 粘液型铜绿假单胞菌 我院临床分离菌 并经过VITEK 鉴定 1.3 试剂 4mg/ml 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺储备液 TMB 美国Amreco 公司 1mg/ml 羊抗兔 IgG-HRP 储备液 华美生物医学工程公司 吐温-20 国产分析纯 藻酸 盐 alginate,Sigma 公司 牛血清白蛋白