肝癌裸鼠移植瘤端粒酶活性表达的近日节律.PDFVIP

肝癌裸鼠移植瘤端粒酶活性表达的近日节律 屈 艺1,王正荣1,黄 翔2,杨春蕾3,刘柏林1 1. 四川大学基础医学与法医学院,四川成都610041; 2. 四川省人民医院,四川成都 610000; 3. 四川大学生命科学院,四川成都 610000 航天医学与医学工程 2003, 16 （5）:332-335 摘 要: 目的 探讨肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA 合成与端粒酶表达的近日节律。方法 在时辰同 步化裸鼠中构建肝癌细胞SMMC27721 裸鼠移植瘤,继续在程控光照条件下饲养,于光照后 3 、9 、15 、21 h 取样,用流式细胞仪测定各时期细胞DNA 含量,细胞周期分布及端粒酶 活性水平。结果 肝癌裸鼠移植瘤细胞DNA 合成随近日节律变化,且伴随端粒酶活性的同步 节律变化,呈近日节律特征。结论 肝癌裸鼠移植瘤的生长与端粒酶活性表达在静止相达高 峰,为制定肿瘤时辰化疗方案提供了有价值的参考。 关键词: 肝癌;DNA 合成; 端粒酶; 近日节律; 基因表达 近代时间生物学证实,生物界进行有规律的周期性活动是一种普遍现象,生物节律是生 命的基本特征之一[1] 。目前已知人体内超过300 种生命活动随昼夜交替呈节律波动,并与 休息—活动周期偶联。例如,在心肌收缩过程中,其收缩力的近日变化与其收缩蛋白的基因 表达的近日节律有关[2] 。生物节律以不同的周期广泛存在于机体不同器官乃至细胞,构成 生命活动的基本运动。针对肿瘤的不同增殖规律可采用不同的治疗方案。 因此,有关肿瘤生物节律的研究正成为科学家关注的焦点。已经证实, 机体对大约30 余种抗癌药物的耐受性或疗效随昼夜节律的改变而波动,波动范围达50 % 以上[3 ] ,因此,根 据人体的生物节律择时治疗肿瘤具有显著的科学性,并逐渐成为肿瘤治疗的前沿课题之 一。研究表明,肿瘤细胞的增殖及其DNA 的合成可能存在一定的昼夜节律变化规律 [4 ,5 ] 。揭示这一变化规律是实现肿瘤择时治疗的关键。国外这方面的研究起步较早,但 近来报道较少。国内仅见中山医科大学肿瘤研究中心在开展鼻咽癌生物节律的相关研究。 研究表明,端粒酶表达水平与细胞周期的进程密切相关,在细胞分裂旺盛时表达较高 [6 ,7 ] 。因而我们推测,肿瘤细胞端粒酶的表达也可能存在一定的生物节律。我们曾报道 端粒酶抑制剂Telo-RZ对裸鼠移植瘤有明显疗效[8] 。本研究旨在探讨肝癌裸鼠移植瘤细 胞DNA 合成与端粒酶表达的生物节律, 以期为制定端粒酶抑制剂的临床时辰化疗方案提 供坚实的理论依据。 方 法 材料 BALB/ C 裸小鼠购自四川省抗生素研究所。饲养于恒温、隔音、空气层流过 滤的环境中。按文献[ 6 ]的方法构建SMMC27721 裸鼠移植瘤并保种传代。流式细胞仪为 美国Coulter 公司产品,型号为Model 100 ,端粒酶检测试剂盒Telomerase PCR EL ISA 购自 - 1 - 美国Roche 公司。 裸鼠处理 BALB/ C 裸鼠16 只,雌雄各半,均为5 周龄,分开饲养。实验前4 周,全部裸 鼠置于程控的独立光照系统中饲养(每日12 h 光照,12 h 黑暗交替) 。4 周后皮下接种 SMMC27721细胞,方法如下:在无菌条件下自保种传代的荷SMMC27721 裸鼠中剥离肿瘤, 剪成约5 mm 大小组织块,分别皮下接种于实验小鼠双侧腋下,肿瘤块大致相等。在相同程 控光照条件下继续饲养(每日12 h 光照,12 h 黑暗交替) ,1 周后对瘤组织取样。取样时间分 别为光照开始后3 、9 、15 、21h (即3 、9 、15 、21 HALO , h