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杀虫微生物专刊 武汉大学学报 〔白然科学版) SpecialIssue
1998年 10月 1.WuhanUniv.(NaturalScienceEdition) Oct.1998-75-77
首猪银纹夜蛾核型多角体病毒v-cath基因
在大肠杆菌中的克隆与表达’
孙晓洁)‘刘德立2.1)芥义鹏2，徐 东2)
(u华中师范大学生命科学院，武汉430070)
(n武汉大学病毒研究所，武汉430072)
摘 要 采用PCR技术成功地扩增了首楷银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的组织蛋白酶基因v-cath，并
克隆到PUC-19中银染双脱氧末端终止法进行正、反向测序，证明扩增片段正确.将v-cath基因亚克隆到表达载
体pRSET-B中，构建了重组表达质粒pRSET/v-cath.将其转化E.coliBI-21.IPTG诱导后能表达V-CATH蛋白.
SDS分析表明:诱导4h表达量最大.表达产物分子量约为36KD.
关键词 v-cath基因，PCR扩增，原核表达，AcNPV
分类号 Q778
0 前言
1 材料与方法
杆状病毒的分子生物学是近年来十分活跃的研
究领域之一，其模型种首信银纹夜蛾核型多角体病 1.1试剂，质粒及菌株
毒(AutographacalifornicaNuclearPolyhedrosis 限制性内切酶,T4DNA连接酶,TayDNA聚
Virus,AcNPV)的研究已取得了重大进展.1993年， 合酶、银染双脱氧测序试剂盒等购自Promega公司
月〔报道了AcNPV基因组的结构和功能区.1994 和华美生物技术公司，质粒pGEM3zf、表达质粒
年，仁2」公布了AcNPVDNA134kb全序列.已鉴定 pRSET-B、大肠杆菌TG1和BL21等由本室保存
的重要基因有50多个，包括核衣壳蛋白vp39基因 1.2PCR扩增及重组质粒的筛选
和v-cath基因.仁3]研究了云杉卷叶蛾核型多角体 参照AcNPVv-cath基因序列设计PCR引物
病毒(多粒包埋)ChoristoneurafumiferanaMNPV 以AcNPVDNA为模板扩增v-cath基因.
(CfMNPV)的v-cath基因的结构及瞬时表达.最近 正向引物pl:
的研究发现:AcNPV的V-CATH蛋白能专一性水 5CGTCTAGAGTAACAAAATGAACAAAAT3
解宿主的肌动蛋白.从而导致细胞骨架的瓦解，宿主 Xbal
昆虫体全部液化成为脓水.可见，v-cath基因是杆状 反向引物P2;
病毒的一个十分重要的基因. 5CGGAGCTCACAACCTTAGCAAGATCTAT3
本文报道首揩银纹夜蛾核型多角体病毒(AcN- Sacl
PV)v-cath基因的克隆与表达.为深入研究v-cath ‘PCR扩增条件:94C,60秒;42C，60秒;72一C.
基因的结构与功能。探讨病毒与宿主细胞的关系奠 120秒.循环35次.预变性5min(94C)，终延伸10
定了基础. min(720C).
，收稿日期 1988-a7-31.刘德立.男，44岁、副教授
湖北省自然科学基
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