溶藻细菌鉴定及溶藻机理的初步研讨.pdf

疋宁-土哇 套国海耳t曲技术与海洋焉曲学术套议语文毒 2006．8．2-6 溶藻细菌鉴定及溶藻机理的初步研究 曹宾霞1，王耀兵2，扬滴1，龚海滨1，李冬梅2 (1．大连水产学院，辽宁大连116023；2，国家海洋环境监测中心，辽宁大连116023) 摘要：细菌的杀藻物质作为开发海洋活性物质作为新型生物杀藻剂提供了一种新思路，具有重要的 应用价值．提取，纯化和鉴定高效的宿主特异·l生细茵杀藻物质对有害赤潮有效治理提供可能．利用 16SrDNA序列分析并结合生理生化特·陛对3株对塔玛亚历山大藻溶藻作用的海洋细菌进行鉴定，并 对它们溶藻方式进行了研究，结果显示：经16SrDNA分子鉴定和生理生化分析确定：喀一l属于假 (Polaribacter)。 tamarense均具有强烈 不同处理的细菌液的溶藻作用是不同的．3株细菌茵悬液与胞外产物对A 的溶解作用，且溶藻效果相差无几，这说明3株细菌不需直接接触藻细胞，而是通过分泌胞外产物来 仍具有很强溶解作用，而KsC—6的高温处理胞外产物溶藻作用不明显，这说明，DN一1，JM一1的 主要杀藻物质具有热稳定性，而Ksc—6的主要杀藻物质不具热稳定性． 目前，治理有害赤潮的主要方法一化学法和物理法在实施的过程中都存在一定缺陷，难以达到 预期效果。近年来，随着研究深入越来越多的人将目光投向细菌治理赤潮。目前已分离的溶藻细菌多 数能分泌特异性物质杀死藻细胞间接地溶藻…，探讨溶藻细菌作用机理，从中分离、纯化高效杀藻物 质对溶藻细菌实际应用具有重要意义。 本研究在对3株海洋细菌的溶藻效应及特异性做了初步研究后，结合它们生理生化特性和形态特 征．利用16SrDNA序列分析对其进行鉴定，同时进一步对它们溶藻机理进行探讨，为3株溶藻细菌 实际应用提供理论依据。制各3抹溶藻细菌10tocells／mL浓度下的不同细菌处理液——活菌菌悬液、 胞外产物、高温处理胞外产物，分别使其与指数增长期塔马亚历山大藻删lexandriumlamorense)进行共 培养，比较不同处理液的溶藻作用，对3株溶藻细菌的溶藻机理进行初步研究。 1．材料方法 。 1．1藻种来源 实验所用塔玛旺历山大藻(丘tamarense)由国家海洋局近岸海域生态环境重点实验室提供。在温 度为21：1：1℃，光照强度为3500LX条件下以舵培养液¨’培养。 1．2细菌来源 3株溶藻细蓥分离自大连周边海域，以2216E海洋细菌培养基【3】，在24～25C条件下培养。 1．3细菌鉴定 I．3．1电镜负染对3株细菌进行形态观察，同时进行革兰色染色及细菌运动力及生理生化特性等观察 1．3．2细菌16SrDNA分子鉴定 一 首先将3株溶藻细菌进行纯培养后，再提取细菌基因组DNA．以提取的DNA为模板，采用 5-AGAG丁1TGATCclBGc代AG·3’1492r．． 16SrDNA保守基因的通J刳引物271。／1492r(27f： 生物工程公司测序，将3株细菌所测序列登录GenBank进行BLAST比对。 1．4细菌不同处理液制各 制备同浓度F3株细菌的活菌苗砖液、胞外产物、高温处理胞外产物。 1．5溶藻试验方法 将二种不同细凶处理液与处丁指数增k．{“J7IuwwP进行舷培养，光学显微镜r观察记录藻细胞 616 t々·土电 奎固瘁耳生曲杖术与露讳南●学术奎议卺文毒 2006．8．2-6 密度变化．试验设计对照纽．所有试验均进行二次重复试验。 Nt--Nck 细胞数净减率=I I／Nckxl00喇q Nt为第t天的处理组细胞数，Nck为第t天的对照组细胞数 2．结果及讨论 2．1细菌鉴定 本研究就3株溶藻细菌溶藻效应激溶藻特异性在前期试验中已做了初步探讨。发现3株溶藻细菌 溶藻效果与细菌浓度成正比．浓度越高溶藻效果越明显，浓度为