玉米CatI基因顺式作用元件ABRE的反式作用因子ABP3的克隆和功能分析研究.pdfVIP

玉米Cat]基因顺式作用元件ABRE的反式 作用因子ABP3的克隆和功能分析 摘 要 干旱、盐渍和低温是诸多非生物逆境中对作物危害最为严重的自然灾害，它 严重影响作物的产量和种植面积，因此，人们一直都很注重对干旱、盐渍和低温 等非生物逆境的研究。由于非生物逆境的复杂性，使人们对植物与非生物逆境之 间的关系的理解仍比较有限，人们在改良作物抗非生物逆境方面的结果并不理 想。随着分子生物学与现代生物技术的发展，使人们从分子水平上深入认识植物 与非生物逆境之间的关系成为现实，并且为改良作物的抗非生物逆境性能开拓了 新的途径。 研究表明在干旱、盐渍和低温等逆境条件下，植物体内产生大量的活性氧， 形成氧化逆境。由于活性氧具有非常活泼的化学性质，它对细胞产生严重的伤害， 因此活性氧的及时清除对植物抗非生物逆境性能的提高具有重要的意义。为了减 少这种伤害，植物在进化过程中形成了酶类和非酶类的抗氧化系统。在活性氧的 清除过程中，过氧化氢酶CAT1起重要的作用，但在逆境条件下，植物本身的抗 氧化系统受诱导表达的能力比较弱，不能及时清除体内的活性氧，影响了植物抗 逆性的提高。在 a〔tl基因的启动子区含有ABRE顺式作用元件，它是逆境条件 下Cat]基因响应ABA作用的重要元件，事实上许多抗非生物逆境相关的基因都 含有ABRE顺式作用元件，所以通过ABRE顺式作用元件来调控 a〔t]基因的表 达的转录因子的研究具有重要的意义。因为这样的反式作用因子它不仅仅是能够 调控Catl基因的表达，还可能调控其它一系列的抗氧化基因和相关的抗非生物 逆境基因的表达。 通过本论文的研究工作得到的主要结论如下: 1、通过5RACE的方法得到了ABP3基因的全长cDNA序列为1465bp，推测 的读码框为843bp,编码281个氨基酸。ABP3编码的氨基酸全序列在GenBank中 BLAST，表明ABP3属于bHLH(basichelix-loop-helix)类转录因子，与ABP3同源性 最高的是来源于水稻基因组中的SPA7，为39.1。与拟南芥的hypotheticalprotein AT4g36930,bHLH(basichelix-loop-helix)proteinSPATULA,phytochrome(光敏色素) interactingfactor3(PIF3)也有较高的同源性。 2、通过体外结合特异性分析表明ABP3具有DNA结合结构域，并且具有Cat] 基因顺式作用元件ABRE结合特异性。ABP3转录因子结合是启动子区ABRE核心 元件的CACGTG碱基序列。 3、通过酵母细胞中的转录激活分析表明ABP3没有激活报告基因的表达，在酵 母体内没有转录激活功能，推测其可能的功能是1)、该转录因子只有DNA结合结构 域，没有转录激活结构域。2)、该转录因子是一个转录抑制子，抑制报告基因的表 达。3).ABP3在基因的表达中起协同作用。 4、采用农杆菌介导真空渗透法将构建到植物表达载体pB1121上的ABP3全长 基因转入模式植物拟南芥中，通过转化植株的分子鉴定 (PCR)，得到了转ABP3基 因拟南芥阳性种子，对转基因种子进行了初步的筛选。下一步的工作将是筛选纯系种 子进行抗性生理功能分析。 综上所述，通过本论文的研究工作，证明了转录因子ABP3具有ABRE结 合特异性，虽然其在酵母体内没有转录激活功能，但我们将通过转基因的手段研 究其在植物中生理功能，为改良作物抗非生物逆境的能力提供优良基因源。 关键词:玉米 转录因子 ABP3 ABRE 拟南芥 CloningandFunctionalAnalysisoftrans-actingFactorABP3Bindingtocis- actingElementABREofMaizeCallGene Abstract:Plantproductivityisstonglyinfluenced勿 abioticstresscontions inducedbydrought,highsaltandlowtemperatureect..Thoughpoplehavepaid attentiontotheresearchofabioticstressessuchasdrought,highsaltandlow temperatureforal