综合实验辅导c_2007-2008.02.pptVIP

诱变物质的微核检测技术——蚕豆根尖微核检测与应用 农学院生物技术系杨先泉、赵勤、吴麟 提纲 实验目的 实验原理 实验材料 用具与药品 实验流程 1. 实验目的(p76) 了解诱变物质微核检测技术原理与应用 掌握蚕豆根尖微核检测技术 了解研究性试验开展的基本环节 实验教学角度：综合性实验 实验内容角度：研究性试验(非验证性实验) 2. 实验原理 2.1 微核的概念与形成 2.2 微核检测技术 2.3 微核检测的应用 2.1 微核的概念与形成 微核(micronuclei, MN/MCN) 染色体畸变在细胞间期的表现形式 结构变异：无着丝粒断片 数目变异：滞后的整/多条染色体 断片与滞后染色体形成微核? 微核的一般特征(p76)与显微观察 核膜重建机制与微核形成 微核的显微观察 微核的显微观察 微核的显微观察(减数分裂) 微核的自动分析 2.2 微核检测技术 常用技术体系 小鼠骨髓细胞微核检测(p77-78) 鸭跖草四分孢子微核检测(p78-79) 蚕豆根尖微核检测(p78-79) 几种技术体系比较(p76) 选择“蚕豆根尖微核检测” 鸭跖草四分孢子微核 2.3 微核检测的应用 化合物致突变、致畸、致癌性检测 新药、食品添加剂及其它化合物 环境中有害物质 辐射损伤 染色体遗传疾病与癌症前期诊断 …… 3. 实验材料 蚕豆(Vicia faba, 2n=12)种子(p76) “松滋青皮豆”的特殊性 其它品种注意事项 实验室准备一个品种，如果要比较不同品种对诱导物的敏感程度，请自备不同的蚕豆品种的种子 4. 用具与药品 蚕豆发根、取材(p10) 微核诱导处理(p77) 若干种待测诱导物(如不同来源的污水)，由各组同学采集、准备 阳性对照(NaN3)：已证明可诱导微核形成 阴性对照(洁浄水样)：微核形成率接近于0 根尖压片与显微观察(p10) 5. 实验流程 准备工作： 查阅文献 确定研究目的 如：待测物、蚕豆品种差异等 制订试验方案 蚕豆发根、取材 处理与恢复培养 取材制片、镜检观测 结果分析、撰写报告(论文) 试验方案(计划、设计) 前言 前人的研究、本试验目的、意义 材料与方法 操作方法、试验设计与数据分析方法 进度安排 包括组内的分工 预期结果 特别注意：不是预期结论 参考文献 5. 实验流程：准备工作 每个自然班分成4个组 人数基本相同、确定每小组的组长 确定试验目的、各小组所用的处理因素(阴性对照、阳性对照、两种污水处理) 上报分组名单(组长) 实验开始前提交试验方案(班内协调、统一时间安排) 实验工作时间安排参考 各专业综合实验时间 生物科学 生物技术 化学生物学 植物科学 * * 综合实验(p76-80) 杜邦不粘锅?特富龙250℃高温以上会产生致癌物质？ 亚硒酸盐对蚕豆根尖细胞的遗传损伤效应?硒能破坏生物的遗传稳定性 四种除草剂对泥鳅细胞细胞遗传毒性的研究 ?除草剂的环境危害检测 人外周血网织红细胞微核作为辐射生物剂量仪的初步研究?辐射损伤的评估新方法 口腔粘膜癌前病变脱落细胞微核计数的研究 ?微核的出现预示着癌前病变发生 2~4h 24h 22~24h 12~24h 36~48h 12~24h 24h 大致时间 组 第二阶段催芽(其间检查水分) 3 组 结果分析与报告写作 组 解离、制片观察 8+ 组 根尖取材、固定 7 组 恢复培养 6 组 诱导处理 5 组 第一阶段催芽 2 自然班 浸种(其间换水两次) 1 班、组 方案、材料与待测物准备 注意 工作内容 天