代谢控制发酵的基本思想2.ppt

第三章 代谢控制发酵的基本思想 ;基本思想：;四. 增加前体物的合成;(1) 在分支合成途径中，切断目的产物外的其他控制共用酶的终产物分支合成途径，增多目的产物的前体，使目的产物的产量提高。;例1 ;例2：;（2）目的产物的生物合成从别的终产物（氨基酸等）开始时（即别的终产物是目的产物生物合成的前体），除设法解除目的产物自身合成的反馈调节外，也应该设法解除其前体物合成的调节。;举例：;葡萄糖;（3）在生物合成途径中,分支点的分解途径的代谢流增强，使分支点处的中间产物增多，导致目的产物的积累增加。 ;;（4）利用基因工程技术，将生物合成途径中的关键酶基因克隆到 多拷贝质粒上，使其大量扩增，从而也就增加了目的产物的前体物的合成。 近年来已见报道的有苏氨酸、色氨酸、脯氨酸、缬氨酸、酪氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和谷胱甘肽等氨基酸育种应用重组DNA技术提高产量。 ;有报道将具有结构类似物抗性的E.coli K12菌株中Thr操纵子与pBR322质粒相结合，获得重组质粒再转移给适当的受体菌，由于基因扩增，此基因工程菌可产苏氨酸达55g/L，比原株提高3～4倍。 ;一个细胞在代谢调节中产生阻遏物的量仅满足于和操纵基因结合，如果细胞中含有很多的操纵基因和结构基因，那么一个调节基因所产生的阻遏物就不足以阻遏全部操纵子的活力，因而逃避了调节基因产生的阻遏作用，称为“逃避合成”，这是最直接的提高目的产物产量的方法之一。 ;例如，β-半乳糖苷酶、青霉素酶、氯霉素转酰酶和天冬氨酸转氨甲酰酶，可借助含有相应结构基因的质粒转移给受体培养物来增加产量；利用含有对苯丙氨酸合成酶编码的结构基因的转导噬菌体可使该酶产量增加15倍。;小结： 增加前体物合成的途径：;五、特殊调节机制的利用;1.多种产物控制机制的利用;;2.平衡合成的利用;在平衡合成机制中，由于第二个终产物的过剩逆转反馈控制，所以，尽管存在反馈控制也能积累目的产物。;举例：;所谓代谢互锁（metabolic interlock），就是从生物合成途径来看，似乎是受一种完全无关的终产物的控制，它只是在较高浓度下才发生，而且这种抑制（阻遏）作用是部分性的，不完全的。;谷氨酸;例：黄色短杆菌赖氨酸的合成调节;代谢互锁不仅具有抑制与阻遏作用，还发现具有激活作用。 如：枯草芽孢杆菌色氨酸的生物合成途径中，氨茴酸合成酶的活性被组氨酸激活，使用枯草芽孢杆菌的抗5-氟色氨酸突变株生产色氨酸时，通过添加组氨酸使色氨酸产量由2g/L提高到3.4g/L。;4.优先合成（preference synthesis）的变换;在分支合成途径的调节中，因为在分支点处的优先合成与反馈控制一起完成重要的功能，所以优先合成的转换会引起一种终产物的过剩合成。;;六、条件突变株的应用; 温度敏感性突变;温度敏感型突变的位置常发生在酶的结构基因上，致使一个氨基酸被另一个氨基酸代替。 温度敏感突变株高温下酶失活，因而不能生长。改变温度，酶活性在0～100％之间变化，但是难以恢复到100％野生型活性。;如果该酶是蛋白质，维生素或核苷酸生物合成途径上的酶，则该突变株高温下就是一种营养缺陷型。 例：如果突变位置发生在为亮氨酸合成酶系编码的基因中，使翻译出来的酶对温度敏感，则高温时就不能合成亮氨酸，即成为亮氨酸缺陷型。;例如：;在抗生素和酶制剂的工业生产中，为了改良菌株，提高产量，常会丧失菌株的孢子形成能力，造成保存菌株与传代的困难。此时，可选育在高温下丧失孢子形成能力，高生产性的温度敏感型突变株，高温下生产，低温下形成孢子，进行保存与传代。