携硒、锌、VitE大豆磷脂脂质体对.docVIP

精品论文 参考文献 携硒、锌、VitE大豆磷脂脂质体对 易 华 刘爱军（广州中医药大学基础医学院 广东广州 510006） 【中图分类号】R542.2 【文献标识码】 A 【文章编号】1672-5085 (2010)24-0182-02 【摘要】 目的 携硒、锌、维生素E大豆磷脂脂质体可通过抑制caspase-3表达发挥保护心肌缺血损伤的效应。 【关键词】 硒 锌 维生素E 大豆磷脂脂质体 心肌缺血 Caspases蛋白 本研究拟以大豆磷脂脂质体（SPL）包裹硒、锌、维生素E制成口服液给大鼠灌服，探讨其对实验性心肌缺血的保护效应的机理是否与Caspase-3有关。 1 材料和方法 1.1药品与试剂 精制大豆磷脂，维生素E，亚硒酸钠，硫酸锌，盐酸异丙基肾上腺素；脂质体的制备与评估见文献1。 1.2 动物分组及处理 体重200～250g的Wistar大鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只。即Ⅰ组，正常对照组；Ⅱ组，单纯心肌缺血组；Ⅲ组，大豆磷脂脂质体（SPL）保护组；Ⅳ组，携硒、锌、维生素E的SPL保护组。后3组均按Rona法复制心肌缺血模型，异丙基肾上腺素（ISO）30mg/kg，皮下注射，连续3天。对照组则注射等量的生理盐水。造模前Ⅲ组和Ⅳ组大鼠分别灌服SPL（150mg/㎏）和携硒、锌、维生素E的SPL20天，灌胃量为1ml/100g,Ⅰ、Ⅱ两组则灌服等量的生理盐水。实验结束，于末次注射ISO后60min以20%乌拉坦麻醉动物（5ml/kg），断头处死后立即剖取心脏，取左室心尖部组织于10%甲醛液固定，常规病理光镜制片。 1.3组织学观察 病理切片HE染色后于光镜下观察，组织学改变分为4度：I度，无组织学改变；II度，心肌间质血管充血、扩张，但无明显心肌坏死；III度，心肌细胞出现点状坏死；IV度，心肌细胞出现小灶状坏死，心肌间质血管扩张、充血，伴有少量淋巴细胞浸润。 1.4 免疫组化法检测Caspases-3表达 抗体及免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。形态计量学方法：每组动物随机取6张切片测定，在400倍视野下，每张切片按从左到右的顺序取5个视野，以视野数为单位，每组共30个视野（n=30）。 用HAIPS-1000高清晰彩色病理图象测量系统进行测量，选取OD值（平均光密度）为半定量参数。 1.5 统计学处理 数据输入STATISTICA软件进行统计学处理。 2 结果 2.1 心肌组织病理改变 2.2 Caspases蛋白表达的检测 光镜下，四组心肌细胞的Caspases在胞浆中均成片表达，呈棕色反应。图像分析结果显示：与正常组比较，缺血组Caspases蛋白表达明显增多（Plt;0.01），SPL处理后，较缺血组而言Caspases蛋白表达量虽有下降的趋势，但差异无统计学意义；经携硒、锌、维生素E的SPL 处理后， Caspases-3蛋白表达量明显降低（Plt;0.05）。 3 讨论 本实验利用ISO制成心肌缺血损伤模型，由病理形态学改变可知模型复制成功。课题组前期工作显示，携硒、锌、维生素E的SPL可通过增强Bcl-2蛋白表达、降低Bax蛋白表达而抑制细胞凋亡保护缺血心肌。 Casepases是一组天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶，其中反应链下游Casepases-3较为重要，Casepase-3介导了一个共同的细胞凋亡通路，它对于决定细胞凋亡的命运是至关重要的。本文结果表明缺血组Caspase-3的表达较正常对照组明显增多（Plt;0.05），而SPL保护组Caspase-3的表达显著减少（Plt;0.01）。推测可能是补充携硒、锌、维生素E的SPL后，能抑制氧化应激，保护生物膜，维持线粒体膜结构的完整性。而线粒体的代???活动及结构功能元件在凋亡发生中发挥重要作用，Yang等的研究表明Caspase激活依赖于线粒体上Cytc的释放，Bcl-2也是在线粒体通过与ced-4作用抑制Caspase的激活。Yaoita H则认为，心肌细胞缺血时一些促凋亡及促坏死信号均作用于线粒体这一共同通路而发挥作用。可见补充携硒、锌、维生素E的SPL可通过保护生物膜尤其是线粒体膜而减少心肌细胞的凋亡和坏死，其机制与抑制Caspase-3表达相关。 参 考 文 献 [1] 易华，董传仁，孙军.携硒、锌、维生素E大豆磷脂脂质体对大鼠心肌细胞凋亡的影响.中国临床康复杂志，2005，27（9）：4