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一例猪轮状病毒和圆环病毒2型混合感染的案例报道 龚双燕 李小璟 李幽幽 陈瑛琪 蔡瑶 李雨濛 徐逸飞 徐志文 朱玲 四川农业大学动物医学院 四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室 X 关注成功！ 加关注后您将方便地在 我的关注中得到本文献的被引频次变化的通知！ 新浪微博 腾讯微博 人人网 开心网 豆瓣网 网易微博 摘????要： 2017年6月, 四川省绵阳市某猪场仔猪出现渐进性消瘦、严重腹泻、呕吐、部分病猪死亡等临床症状, 采集发病猪的肠道、淋巴结等样品, 应用PCR、RT-PCR方法进行实验室检测。结果表明, 该猪场为猪轮状病毒 (Po RV) 和猪圆环病毒2型 (PCV2) 混合感染。通过采取综合防控措施, 病情得到有效控制, 减少了该猪场的经济损失。 关键词： 猪轮状病毒; 猪圆环病毒2型; 混合感染; 诊断; 作者简介：龚双燕 (1994-) , 女, 重庆开县人, 在读硕士研究生, 研究方向是动物传染病病原分子生物学.E-mail:gsymanas@163.com 作者简介：朱玲, 女, 教授, 博士, 研究方向为动物传染病病原分子生物学.E-mail:abtcxzw@126.com 收稿日期：2017-10-20 基金：四川省科技支撑计划 (2017NZ0038) Received： 2017-10-20 轮状病毒 (rotavirus) 属呼肠孤病毒科轮状病毒属, 可引起各种幼龄动物腹泻[1], 其中猪轮状病毒 (porcine rotavirus, Po RV) 是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原之一, 感染仔猪主要表现为腹泻、呕吐, 严重者脱水, 且易继发其他细菌性感染, 导致仔猪死亡率升高, 生长缓慢, 给世界各国的畜牧业造成严重的经济损失[2]。Po RV存在多种血清型, 各血清型间无交叉保护或交叉保护性很差[3-4]。资料显示, 我国猪群中轮状病毒的感染以A群为主, 在A群Po RV中VP7是中和抗原基因, 它编码轮状病毒外壳上的主要糖蛋白和中和抗原蛋白, 在各毒株中高度保守[5]。 猪圆环病毒病 (PCVD) 是由猪圆环病毒2型 (PCV2) 引起的一种传染病。PCV2可导致断奶仔猪多系统衰竭综合征的发生, 也与猪皮炎肾病综合征和仔猪先天性震颤相关[6]。PCV2不仅造成猪生长缓慢、饲料报酬降低, 还可造成机体免疫抑制, 引起其它疾病的暴发[7], 严重危害养猪业的发展。 1 发病情况、临床症状和剖检病变 2017年6月, 四川省绵阳市某猪场病猪普遍表现出眼眶周围呈黑色, 精神沉郁, 食欲不振;2周龄内仔猪突发呕吐、腹泻排出糊状或者水样粪便, 呈黄绿色、灰色或者黄白色, 并混杂一定量的絮状物, 散发腥臭味, 死亡率高达95%以上。 解剖病死猪观察病变发现, 肺脏肉变, 肺门淋巴结及肠系膜淋巴结不同程度肿大出血, 脾肿大发黑, 有胸腔积液, 肠内有灰绿色或黄白色黏稠液体, 血液凝固不良, 剖检采样后经实验室检验, 结合临床症状, 诊断为PCV2及Po RV混合感染。对发病猪曾用抗生素类药物治疗, 疗效不理想。该猪场注射猪传染性胃肠炎、轮状病毒二联弱毒疫苗 (哈尔滨兽医研究所研制) 和猪圆环病毒疫苗, 并采取综合防治措施后, 病情得到有效控制, 减少了猪场的经济损失。 2 实验室检测 2.1 试验地点 病料 (1头病死仔猪编号1和1头肥育猪编号2) 送至四川农业大学动物生物技术中心进行检测。 2.2 试验试剂 DNA、RNA提取试剂盒, Taq DNA聚合酶, RNA反转录试剂盒, 均购自Ta Ka Ra公司;引物均由上海Sangon生物工程公司合成。 2.3 试验器材 美国Thermo Micro21R微量离心机购自赛默飞成都分公司;PCR仪购自成都百乐科技有限公司;Eppendorf (EP) 管、10 m L注射器。 2.4 检测方法 先提取病料RNA和DNA, 采用反转录-聚合酶链式反应RT-PCR检测Po RV, 聚合酶链式反应PCR方法检测PCV2。试验方法均按照试剂盒说明书及分子克隆实验指南 (第3版) [8]操作。所用引物如下。 根据Gen Bank已发表的PCV2序列, 笔者自己设计一对特异引物PCV2-F、PCV2-R, 预计扩增产物大小为178 bp, Po RV引物源自本实验室检测用引物, 均由生工生物工程 (上海) 股份有限公司合成 (表1) 。 表1 PCR引物序列 ?? 下载原表 3 结果与防治措施 (1) 图1中1、2泳道为猪圆环病毒检测结果, 条带大小为178 bp, 呈阳性;图2中1、2泳道为猪轮状病毒检测结果, 条带大小为500 bp, 呈阳性。图1、图2中分别设有阴、阳性对照, 证明本试验是成立的, 可信度极高。根据检验结果, 结