慢病毒介导RNA干扰Nogo受体基因治疗脊髓损伤的实验研究.pdfVIP

生堡处型盘壶!Q!旦生!Q旦筮堡鲞筮；Q鹅曼!也』墨!疆：Q!鲤蛙!垫!!：y!!：堡：№：垫 ·1573· ．论著． 慢病毒介导RNA干扰Nogo受体基因 治疗脊髓损伤的实验研究 吕碧涛袁文徐盛明 【摘要】 目的观察慢病毒介导RNA干扰大鼠神经元Nogo受体(NgR)基因表达对脊髓损伤的 修复作用。方法将前期实验中构建好的针对NgR的特异性小干扰RNA系列siNgRl99慢病毒重组 体，按感染复数=3体外转染已培养好的大鼠皮层神经元细胞。荧光电镜观察慢病毒重组体的转染 效率，采用实时荧光定鼍PCR检测NgR基因沉默效率，验证慢病毒重组体的有效性。建立大鼠莺度 脊髓损伤模型，大鼠分组后分别于大脑皮层运动区注射生理盐水、慢病毒重组体，采用BBB评分法观 测大鼠后肢运动恢复情况，采用神经示踪法观察脊髓损伤区神经纤维生长情况。结果慢病毒重组 体体外转染神经元细胞的效率99％，NgR基因沉默效率为6l％。大鼠模型给药后8周，慢病毒重组 体组大鼠脊髓损伤区可观察到神经纤维生长通过，而生理盐水组大鼠脊髓损伤区未见神经纤维生长 通过，BBB评分结果提示慢病毒重组体组大鼠后肢运动功能恢复优于生理盐水组(P0．01)。结论 慢病毒siNgRl99重组体能够促进脊髓损伤区神经纤维的生长，在一定程度上促进脊髓损伤后大鼠后 肢运动功能恢复。 【关键词】慢病毒属；RNA干扰；脊髓损伤；Nogo受体 Lentiviralvector-mediatedRNAinterfere to cord L口Bi- Nogo gene receptorrepairspinal injury 加，YUAN耽凡，xuSheng—ming．Department Second ofOrthopaedics，ChangzhengHospital，theMilitary Medical 2D删．China University．Shanghai anthor：y醐N Corresponding Wen，Email：yuanwenspine@163．corn Toevaluatetheeffectsoflentiviralvector-mediatedRNAinterfere 【Abstract】0bjective geneNogo rat neuronsin cortical cord Therecombinant—lentiviral receptor(NgR)of repairingspinal injury．Methods vectorwithsmall RNA whichhadbeenconstructedWaStransfectedintomtcortical inferringsiNgRl99 neuroncells讥vitroin3 of infectionrateWaSdeterminedwithfluorescent multiplicityinfection(MOI)．ne the WaS recombinantwas detectedPCR intothe microscope，andtargetgene by analysis．Then，the injected conicalmotorareaoftheratswithsevere cord thesalinewasalso intootherrats spinal i