慢病毒载体在RNA干扰中的应用进展.pdfVIP

57—61． ofaco’ FailesTw。CullinaneC。DiakosCI，eta1．Studies [183 oftheMMPinhibitormarimastat：a (本文责任编辑邓丽莉 收稿日期：2010—06—15) bait(III)complex potentialhypoxia-activatedprodrug[J]．Chemistry，2007， ·综述· 慢病毒载体在RNA干扰中的应用进展’ 梁艳综述，李 涛，周克元审校 (广东医学院生物化学与分子生物学研究所，湛江524023) 【摘要】小分子RNA干扰技术是一种新兴的特异性地阻断某些基因表达的研究手段，在肿瘤、病毒感染，遗传病及其它疾 病的治疗中均有广泛应用。慢病毒载体是一类来源于重组逆转录病毒的载体，由于具有可以感染非分裂期与分裂期细胞，容纳大 的外源性目的基因片段，免疫反应小等特点，现已成为转移目的基因进入哺乳动物细胞的理想载体。将慢病毒载体应用于RNA 干扰当中，可以特异性抑制哺乳动物的各类细胞中基因的表达。成为基因功能研究和基因治疗的有力手段。本文将试图对近期慢 病毒载体在RNA干扰当中的应用的最新进展进行综述。 【关键词】慢病毒载体； RNA干扰；shRNA DOI：10．3969／j．issn．1673—4130．2010．11．035 中图分类号：Q522；R459．9 文献标识码：A 文章编号：1673—4130(2010)11-1282-03 在RNA干扰(RNAinterference，RNAi)介导的基因沉默 慢病毒在RNA干扰中应用的优势 现象发现不到十年来，RNA干扰技术已经广泛应用于一些疾 病临床治疗的研究。慢病毒载体(Lentiviralvector，LV)作为RNA干扰(RNA 介导RNA干扰的一个工具可在细胞中发挥长期稳定的基因 高度保守的、由双链RNA(double-stranded 沉默效应，越来越受到研究者们的青睐。HIV-I是一种典型的发的靶mRNA高效特异性降解的现象。 慢病毒，目前使用的慢病毒载体绝大多数是在HIV-I基础上 RNA干扰中常用的病毒载体有逆转录病毒载体、腺病毒 构建的。 载体、腺相关病毒载体、慢病毒载体等。与其他载体相比，慢病 毒载体具有以下优点：(1)既可以感染分裂期细胞又能感染非 慢病毒载体的构建原理 分裂期细胞。逆转录病毒载体不能感染非分裂期细胞，Ifli慢病 以H1v一1来源为代表的慢病毒载体系统，一般由两部分毒载体已被证实能有效感染大脑，眼睛，肝脏，造血系统等器官 组成，即载体成分和包装成分。载体成分含有包装、反转录和 的非分裂期细胞。腺病毒和腺相关病毒载体虽然具有感染非 整合所需的顺式作用元件，同时具有异源启动子控制下的多克 分裂期细胞的能力，但容易引起炎症和毒性反应。另外，慢病 毒基因组叮以与宿主基因组整合，因此更适合长期诱导转移基 隆位点。包装成分则与载体成分互补，由HIV-1基因组删除 了包装、反转录和整合所需的顺式作用元件，保留了产生病毒 因的表达。(2)病毒突变和产生有复制能力的病毒机率小。在 颗粒所必需的蛋白相关的结构基因。应用最广泛的第三代慢 逆转录病毒载体治疗X一连锁免疫缺陷疾病的临床实验中，由 病毒载体包含有4种质粒。其中一个是载体成分即基因转移 于前病毒在细胞原癌基因附近的整合导致原癌基因的突变，4 载体质粒，它包含了用于基因组RNA复制和包装的顺式作用 例病人都发展成了白血病[2]。而在若干临床动物模型中的研 元件如增强子、启动子序列和病毒的包装信号(m)和供插入外