酪氨酸激酶Jak3与核小体组装蛋白Nap1的相互作用.pdfVIP

生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ， （）： !# !#$$%#% ’()’ *+,(-+.+(’ /0 *+,1-23+(’ 3+4+(’ $!!! % 5 6 7 # ’# 85958!!: ; 酪氨酸激酶 ()*% 与核小体组装蛋白#)+, 的相互作用 季红斌 翟琦巍 朱锦芳 孙兰英 刘新垣 郑仲承 ! （中国科学院上海生物化学研究所，上海 $!!!85 ） 摘要 在 白细胞介素 （ ， ）的信号转导过程中，酪氨酸激酶 起着至关重要的作用。它不但参 9$ FK0/NA/JOFK9$ +P9$ ?CO8 与 通路的传递，而且通过与一些未知的信号分子相互作用调节一些原癌基因的表达，如 ， 等。 ?CO930C0 M9! # M9 $% 由于 目前越来越多的证据表明在信号转导过程中两个蛋白质之间的相互作用需要磷酸酪氨酸的存在，为此构建了 酪氨酸磷酸化相关的酵母双杂交系统，以进一步阐释 ?CO8 在 +P9$ 信号通路中的作用。利用这个系统，以?CO8 的 4 端 ?-8 Q ?- 区域筛选外周血白细胞 MR4’ 库。结果得到了! 多个双阳性克隆。测序结果表明其中一个为核小体 组装蛋白 （ ）的基因，它编码 个氨基酸残基。实验还证明 与 之间的相互作用在一定程度上依赖 5 4CS5 8%$ 4CS5 ?CO8 于酪氨酸磷酸化。用免疫共沉淀及蛋白质印迹实验证明在小鼠原 * 淋巴细胞株 *’B: *,8 细胞中确实存在着核小 ! 体组装蛋白4CS5 与酪氨酸激酶 ?CO8 4 端的相互作用。 关键词 ；信号转导；酪氨酸磷酸化相关的酵母双杂交系统；核小体组装蛋白 （ ） ?CO8 5 4CS5 白细胞介素 受体 （ ， 酵母双杂交系统的基础上进行了改进，构建了酪氨 9$ FK0/NA/JOFK9$ N/M/S0N +P9 $T）与生长因子受体不同，它本身不具有酪氨酸激 酸磷酸化相关的酵母双杂交系统，寻找与 ?CO8 的 4 酶活性，主要通过与其结合的非受体型酪氨酸激酶 端 ?-8 Q ?- 区域相互作用的分子，以期阐明信号 来发挥功能，如与 结合的有 ， ， +P9$T! ?CO5 3UO PMO 转导的具体过程及不同信号通路之间的相互作用。 ［］ 等，与 +P9$T 结合的有 ?CO8 5 。这些激酶在 +P9$ 的 信号转导中起着非常重要的作用。如 ?CO8 不但参与 材料和方法（ ） 5 .C0/NFCAG CKV ./0LVG ［］ 了?CO930C0 途径而且介导 了 M9 $% 的诱导表达 $ 。 , = , 质粒构建