棕榈酸对胰岛MIN6细胞胰岛素成熟的影响研究.pdfVIP

动物医学进展。2013，34(2)：44—48 ProgressinVeterinaryM edicine 棕榈酸对胰岛MIN6细胞胰岛素成熟的影响 张晶晶 ，孔凡青 ，李嘉欣 ，冯若鹏。 (1．包头医学院生物化学与分子生物学教研室，内蒙古包头 014040；2．包头医学院组织胚胎学教研室，内蒙古包头 014040) 摘 要：为研究棕榈酸对胰岛MIN6细胞胰岛素成熟的影响，用0．3mmol／L棕榈酸处理体外培养的MIN6 细胞 ，通过Westernblot检测内质网应激 (ERstress)相关蛋白、激素原转化酶 l(PCI)和激素原转化酶2(PC2)表 达水平。通过 EusA检测细胞培养液中成熟胰岛素在总胰岛素中所 占的比例 ，判断棕榈酸对 MIN6细胞胰岛 素剪切的影响。结果表明，与对照组相比，棕榈酸会导致MIN6细胞 ERStress相关分子表达升高，同时与胰岛 素剪切相关的PC1和PC2蛋 白水平明显降低。MIN6细胞 中胰 岛素的剪切成熟在棕榈酸作用下受到影响，成 熟胰岛素的产生显著降低。说明棕榈酸可诱导MIN6细胞发生内质网应激，影响与胰岛素剪切成熟相关的PC1 和 PC2蛋白的表达，结果导致 MIN6细胞分泌的成熟胰岛素在总胰岛素中所 占比例降低。 关键词：棕榈酸；内质网应激；激素原转化酶 1；激素原转化酶 2；胰岛素成熟 中图分类号 ：R977．21 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2013)02—0044—05 长期的高糖高脂饮食是诱发 2型糖尿病的重要 1 材料与方法 因素，而高糖以及高游离脂肪酸激活 J3细胞内质网应 1．1 材料 激 (endoplasmicreticulum stress，ERstress)信号通路 MIN6细胞购 自北京协和医学院基础医学研究所 是研究人员关注的热点 。有研究表 明糖尿病发生 基础医学细胞中心；棕榈酸 (palmitate)、牛血清 白蛋白 时胰岛8细胞数量减少、胰岛素分泌异常都与 I3细胞 (bovineserumalbumin，BSA)，Sigma公 司产品；高糖 发生的内质网应激反应密切相关[2j。 DMEM，胎牛血清 (fetalbovineserum，FBS)，Hyclone 胰岛素的成熟依赖于激素原转化酶 1(prohor— 公司产品；ECL发光试剂与辣根过氧化物酶标记山羊 moneconvertase1，PC1)和激素原转化酶 2(prohor— 抗兔或小鼠的IgG二抗 ，北京普利莱基因技术有限公 moneconvertase2，PC2)对胰岛素原的剪切l4]，高游离 司产 品；Phospho-elF2a，elF2a，CHOP，PC1，PC2，Pax6 脂肪酸引起的内质网应激是否会对这个过程产生影 和Pdx-1抗体，CellSignalingTechnology公司产 品； 响，具体机制尚不清楚。棕榈酸是血液中含量最丰富 检测总胰岛素的MouseInsulinEUSAKit(TMB)和 的游离脂肪酸，研究表明体内长期游离脂肪酸水平升 检测成熟胰岛素的MouseInsulin(S-type)ELISAKit， 高可能与胰岛8细胞功能异常及凋亡密切相关 ]，在 北京伊普瑞斯科技有限公司产品；PCR引物 由北京奥 培养液中添加棕榈酸是体外模拟 高脂模型的重要手