2002诺贝尔-质谱.pptVIP

肽和蛋白质序列的质谱测定方法 Edman降解（Edmandegradation）：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。N末端氨基酸残基被苯异硫氰酸酯修饰，然后从多肽链上切下修饰的残基，再经层析鉴定，余下的多肽链（少了一个残基）被回收再进行下一轮降解循环。 2.1以化学降解反应为基础的质谱测序方法 肽和蛋白质序列的质谱测定方法 2.1以化学降解反应为基础的质谱测序方法 用异硫氰酸苯酯（PITC）与待分析多肽的N-端氨基在碱性条件下反应，生成苯氨基硫代甲酰（PTC）的衍生物，然后用酸处理，关环，肽链N-端被选择性地切断，得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂将该衍生物萃取出来，酸作用下，该衍生物不稳定，会继续反应，形成一个稳定的苯基乙内酰硫脲（PTH）衍生物。余下肽链中的酰胺键不受影响。 肽和蛋白质序列的质谱测定方法 2.1以化学降解反应为基础的质谱测序方法 1993年，Chair等在Edman测序法的基础上，在偶联试 剂中加入少量与PITC(异硫氰酸苯酯)结构相似，但与肽氮端形成衍生物不被三氟乙酸水解的苯异氰酸酯(PIC)，通过多次 Edman降解循环，产生逐一相差一个氨基酸残基的梯状肽分子系列，然后通过质谱表征的分子量差别了解全肽序列 。 在此基础上又发展出多种新的测序法，他们主要的着眼点在肽链氮端偶联剂的选择上。这些替代偶合剂在一定程度上解决了一些原有方法的弊端：如三氟乙基异硫氰酸酯与烯丙基异硫氰酸酯都可挥发，能通过抽真空除去，避免了有机溶剂萃取引起的非极性肽链的丢失； 2 ，6 - 二异丙基苯基异氰酸酯与肽链氮端反应产物具有较好的稳定性。 PITC：异硫氰酸苯酯； PIC：苯异氰酸酯； TFA：三氟乙酸 肽和蛋白质序列的质谱测定方法 2.2以酶解为基础的质谱测序方法 反应中所使用的酶要求能够专一性的水解肽链 N末端或 C末端的第一个氨基酸残基，而且要有较好的普适性 ，即对于肽链末端的任一氨基酸残基均可水解。 主要包括：C端水解的羧 肽酶（carboxypeptidase）、 N端水解的白氨酸氨肽酶（leucine aminopeptidase），其中羧肽酶包括多种类型， 羧肽酶 Y（carboxypeptidase Y）由于可水解任意氨基酸残基而得到广泛的使用。 肽和蛋白质序列的质谱测定方法 2.2以酶解为基础的质谱测序方法 在酶解过程中，调节不同的反应时同或反应浓度，就可以得到相差一个氨基酸残基的所有肽链水解产物，从而获得肽的完全序列信息。这种方法操作简单，由于水解产物均为肽键断裂产物，谱图相对易于分析 ，而且羧肽 酶水懈肽链端， 可以得到 C端序列信息。但酶解方法也有其缺陷 ，由于酶水解动力学的原因 ， 酶解反 应不容易控制， 水解不同氨基酸残基速率不同， 所得到的产物肽在质谱上的强度各异， 往往容易产生某 个肽链的丢失，但只要很好选择反应 中酶浓度及反 应时间 ，这种方法会有良好的应用前景。 谢 谢 * 质谱的应用--在生物化学和医药学中的应用 　　生物化学是研究生物的化学组成和它们的化学活动的科学。对于重要的生物高分子如蛋白质、化合物的结构进行分析，以阐明结构和他们的生物功能之间的关系，同时研究生物体合成或分解这些物质的代谢过程，在这些知识的基础上，人们在分子水平上阐明生长、运动、发育、遗传等各种生命现象。这门科学仅就分析工作而言就非常复杂，没有哪一种技术可以单独地解决任何一个局部问题；而它的意义又是如此重大 ，以致使得近代科学动员和创造大量新技术为之服务。质谱以其高超的灵敏度和特征谱图的本领而成为重要的手段。在这个领域的应用，是有机质谱研究最活跃、内容最丰富的部分。 　　生物化学也是临床医学的重要基础。例如，用质谱研究药物在人体中的代谢过程；质谱分析尿、血、皮脂、体液等的变化，以辅助正确诊断等应用方兴未艾。至于药物化学，无论是合成新药或由天然药物中找寻有效成分，甚至药物需质量鉴测，质谱技术都是重要的手段。特别是中药的研究，是我国有机质谱专业中应用最多、成效最显著的分支。 　　⑴蛋白质研究 　　尽管蛋白质品种多，结构十分复杂，但有它的共性。一种蛋白质的分子是全部或部分由数量有限的氨基酸分子所构成。如果我们把蛋白质比喻为积木搭成的建筑群，氨基酸分子则可以看作是一些形物不同的小木块，用它们搭成的自成单元的小建筑物，这种“中间物”叫做“肽”。蛋白质分子太大了，在研究中必须分段处理，小分子氨基酸双太小了，不容易从它去设想蛋白质的结构，而且氨基酸的分析已由色谱方法比较满意地解决了，所以质谱研究的重点是肽的研究。两个氨基酸以肽搜索结合的酰