第二章-糖和苷.pptVIP

4.苷元与糖、糖与糖之间连接位置的测定 （1）苷元与糖之间连接位置的测定 13C-NMR谱法：利用苷化位移规律，将苷与苷元的碳谱相比较即可鉴别 醇羟基苷化，苷元ａ-碳向低场位移（δ+4～10ppm），β-碳向高场位移（-0.9～-4.6ppm） 酚羟基苷化,苷元ａ-碳向高场位移 ，β-碳向低场位移 （2）糖与糖之间连接位置的测定 化学方法: 将苷的全甲基化物进行甲醇解，鉴定（与对照品共色谱）未全甲醚化的单糖，游离羟基所在位置即糖与糖之间的连接位置。 13C-NMR谱法：利用苷化位移规律，将苷与相应单糖的碳谱数据相比较即可鉴别 。 糖与糖相连，内侧糖连接糖的碳原子移向低场 （δ+4～7 ppm） 相邻碳原子移向高场（δ -1～-4 ppm） 5.糖与糖之间连接顺序的确定 苷 缓和酸水解、酶解 乙酰解 全甲基化甲醇解， 部分苷键断裂 的裂解产物 推 断 分 析 （2）波谱分析法 质谱（MS）法 :主要利用质谱中归属于有关糖基的碎片离子峰或各种分子离子脱糖基的碎片离子峰，可对糖的连接顺序作出判断。 EI-MS (需作成全甲基化、乙酰化或三甲基硅醚化物) 常见各单糖及双糖的全乙酰化物、TMS衍生物 碎片离子峰见书. FD-MS 或FAB-MS：常出现各种脱去不同程度糖基的 碎片离子峰。 核磁共振（NMR）法：13C-NMR谱 碳原子的自旋-弛豫时间（T1）的大小推断。  NT1 随糖链距离的增加而增大 6.苷键构型的确定 （1）利用酶水解法——(酶的专属性) （2）利用开勒（Klyne）经验公式进行计算 Δ[M]D = [M] D苷-[M] D苷元 与各糖的一对甲苷（ａ-、β-）的分子比 旋度相比较， 与ａ-甲苷接近，则该苷键构型为ａ-构型 与β-甲苷接近，则该苷键构型为β-构型 （3）利用核磁共振（NMR）确定苷键构型 13C-NMR谱： 利用端基碳原子的化学位移判断苷键构型：除 D-甘露糖、L-鼠李糖外，绝大多数单糖甲苷，其 ａ-型与β-型的化学位移相差4ppm. 利用端基碳原子与端基质子的偶合常数判断苷键 构型： ａ-甲苷 JC1-H1≈170Hz β-甲苷JC1-H1≈160Hz Δδ10ppm 1H-NMR谱： 利用端基质子偶合常数的大小判断苷键构型 依据 相邻碳原子上质子偶合常数的大小与二者之间的立体夹角有关 H-2ˊ为ａ键的糖 （葡萄糖、木糖、半乳糖） H-2ˊ为e键的糖 （鼠李糖、甘露糖） ａ-苷键 β-苷键 ａ-苷键 β-苷键 J1ˊ2 = 2～3.5Hz J1ˊ2ˊ= 6～9Hz J1ˊ2ˊ= 2 Hz J1ˊ2ˊ2 Hz (Jae、Ф60O) （Jaa、180） （Jee、60） （Jae、60O） J1ˊ2不相等 J1ˊ2相等 意义 可以用于构型的判断 不能用于构型的判断 ａ-D-葡萄糖苷 ａ-L-鼠李糖苷 J1ˊ2 = Jae = 2～3 Hz J1ˊ2 = Jae = 2 Hz β-D-葡萄糖苷 β-L-鼠李糖苷 J1ˊ2 = Jaa = 6～9 Hz J1ˊ2 = Jae = 2 Hz 波谱分析在糖苷结构测定中的应用总结： MS 1H-NMR 13C-NMR  糖种类 糖各质子的δ、J 糖的碳信号 （与标准糖对照） （与标准糖对照） 糖数目 分子量之差 端基质子信号数 端基碳信号数 （ 苷-苷元） （位于低场） （δ90～112ppm） 衍生物信号数 碳信号之差