发酵工程第9讲.ppt

  1、染菌对发酵的影响 几乎所有的发酵工业，都有可能遭受杂菌的污染。染菌 的结果，轻者影响产量或产品质量，重者可能导致倒 罐，甚至停产。 1.1染菌的危害： 1.1.1 分解产物 青霉素发酵染菌，绝大多数杂菌（细短产气杆菌）都能直接产生青霉素酶，而另一些杂菌则可被青霉素诱导而产生青霉素酶。不论在发酵前期、中期或后期，染有能产生青霉素酶的杂菌，都能使青霉素迅速破坏。 1.1.2 导致发酵过程异常 菌体生长速度缓慢、菌体代谢异常或过早老化、耗糖慢、 pH发生异常变化、发酵过程中泡沫异常增多，发酵液颜色异常变化、代谢产物含量下跌、发酵液黏度异常增加。 1.1.3 影响产物的提取、产品质量 对过滤的影响： 发酵液的粘度加大，菌体大多自溶 由于发酵不彻底，基质的残留浓度加度。造成的后果： 过滤时间拉长，影响设备的周转使用，破坏生产平衡 大幅度降低过滤收率。 1.2不同染菌时间对发酵的影响 发酵前期染菌：杂菌与生产菌争夺营养成分，干扰生产菌的繁殖和产物的形成 发酵中期染菌：严重干扰生产菌的繁殖和产物的生成 发酵后期染菌：如杂菌量不大，可继续发酵。如污染严重，可采取措施提前放罐 1.3 不同染菌途径对发酵的影响 种子带菌：种子带菌可使发酵染菌具有延续性。 空气带菌：空气带菌也使发酵染菌具有延续性，导致染菌范围扩大至所有发酵罐。 培养基或设备灭菌不彻底：一般为孤立事件，不具有延续性。 设备渗漏：发酵环境与外界连通，这种途径造成染菌的危害性更大。 2、染菌的判断 杂菌侵入的途径在工业上不外乎原料，菌种，空气，设备四个方面。 原料方面、种子方面、无菌空气、设备方面 从三方面进行： 2.1.1 无菌试验 2.1.2 显微镜检查 2.1.3 生理生化指标的变化 2.1.1无菌试验 判断发酵是否染菌应以无菌试验结果为根据。 无菌试验的目的： 监测培养基、发酵罐及附属设备灭菌是否彻底 监测发酵过程中是否有杂菌从外界侵入 了解整个生产过程中是否存在染菌的隐患和死角。 一般采用酚红肉汤培养基检查：配方：0.3%牛肉膏、0.5%葡萄糖、0.5%氯化钠、0.8%蛋白胨、0.4%的酚红溶液(pH=7.2) a.无菌肉汤培养基空培养 接入样品 培养观察 b.平板划线检查或斜面培养检查： 2.1.2显微镜检查 染色 镜检 多在染菌程度较深时，用于判断杂菌的种类，靠显微镜无法发现染菌初期的杂菌。 2.1.3 通过发酵的生理生化指标检查 除了以上的方法外，在实际生产中还可以根据以下参数的异常变化来判断是否染菌。结合计算机，建模后，可以及早发现与预测染菌。 a: 降糖速度 b: 产酸速度， pH值 c: 溶解氧 d: 光密度 e: 排气中CO2含量 f: 产物含量 g: O2的消耗 2.2 各种检查方法的比较 显微镜检查方法简便、快速，能及时发现杂菌，但由于镜捡取样少，视野的观察面也小，因此不易检出早期杂菌。 平板划线法和肉汤培养方法的缺点是需经较长时间培养才能判断结果，且操作较繁琐，但它要比显微镜能检出更少的杂菌，而且结果也更为准确。 检查结果应以平板划线和肉汤培养结果为主要根据 平板划线和肉汤培养应做三个平行样。 酚红肉汤和平板划线培养样品应保存至放罐后12小 时，确定为无菌时方可弃去。 3 污染杂菌的原因分析 不同发酵阶段的染菌率：将整个发酵周期分成前期、中期和后期三个阶段，分别统计其染菌率。有助于查找染菌的原因。 季节染菌率：统计不同季节的染菌率，可以采取相应的措施制服染菌。 操作染菌率：统计操作工的染菌率，一方面可以分析染菌原因，另一方面可以考核操作工的灭菌操作技术水平。 3.2 染菌原因的分析 原因的分析是为了今后的预防，是积极防范的措施。 避免在发酵生产中污染杂菌应以预防为主。“防重于治”，事前防止胜于事后挽救。 如果一旦发生染菌现象就要尽快找出原因及时纠正、堵塞漏洞才能减少损失，并从中吸取经验教训，避免以后有类似情况发生，保持生产的正常进行。 3.2.2 从染菌的时间分析 a.发酵早期染菌 可能是从种子中带入，或由于培养基灭菌不彻底，或设备有“死角”，清洗不干净而染菌。 b.发酵中后期染菌 可能是无菌空气或中间补料带入杂菌，或发酵设