水稻Osgrp2启动子功能区分析研究.pdfVIP

摘 要 富含甘氨酸的蛋白质(GRP)是广泛存在于植物细胞壁的一种重要结构蛋白， GRP基因的表达具有组织特异性、受发育阶段和多种环境因素的调控，因此GRP 基因为植物基因的表达调控研究提供了一个良好的模式。我们克隆到的水稻GRP 基因Osgrp-2在水稻中的表达有明显的组织特异性和发育阶段特异性，并且可以 受到病毒侵染和机械损伤的诱导。在烟草原生质体瞬间表达系统中对其 2.4Kb 的启动子序列所做的系列缺失分析表明，该启动子的活性同时受到正调控片段 (-2290/-1406)和负调控片段 (-2401/-2291，-1405/-1022)的影响.该启动子的G6 片段(-1021/+2)在转基因烟草和转基因水稻中都能指导GUS报告基因在维管束组 织特异表达，说明其中含有决定维管束表达特异性的启动子顺式元件。 本工作针对Osgrp-2启动子中的负调控片段(-1405/-1022)构建了中间缺失 启动子，在烟草原生质体瞬间表达系统中验证了该片段在全长启动子中的负调控 功能。本工作将Osgrp-2启动子的正调控片段(-2290/-1406)与35S基本启动子 8‘9/十石)融合，通过A乡roinfiltration瞬间表达方法在生长中的叶片中检测了该片 段对启动子活性的正调控功能，表明该片段具有类似增强子的作用，正向和反向 融合都能显著提高35S基本启动子的转录活性。在转墓因植物中所做的GUS组 织化学染色实验表明，该正调控片段与35S基本启动子的嵌合启动子在烟草中表 现为维管束特异表达，说明其中另外含有决定维管组织表达特异性的顺式元件。 为了定位G6启动子片段中的维管束特异表达顺式元件并确定其功能，本工作在 转基因烟草中检测了G6启动子及一系列5.和3快失启动子的组织表达特性，结 果表明一个99by的区域 (-497/-399)中含有维管束特异元件。 另外，本工作还对在转基因植物中验证上述99by区域的功能、确定该区域 中的核蛋白结合位点以及通过在转基因水稻中超童表达和沉默抑制Osgrp-2基因 来揭示该基因的生物功能等方面的研究做了实验设计和基础工作。 关键词:甘氨酸丰富的蛋白质，转基因烟草，农杆菌渗透法，启动子缺失 分析，维管束特异性表达 八bstract Zong-ZhiLiu(Genetics) DirectedbyRongXiangFang Glycine-richproteins(GRPs)ofplantsarewidelyspreadmonocotyledonsand dicoytledons,implyingtheirdiverseandessentialroles.Studyofgeneexpression regulationofGRPsbypromoteranalysiscanhelptounraveltheirbiologicalfunctions AriceGRPgene,Osgrp-2,hasbeenpreviouslyisolatedandsequenced(GenBank U40709).Itsexpressionisvirus-inducibleaswellasregulateddevelopmentallyand induced妙mechanicalinjury.The5deletionanalysisoftheOsgrp-2promoterin tobaccotransientexpressionsystemsrevealedthepresenceofapositiveregulatory region(-2290to-1406)andtwonegativeregulatoryregions(-2401/-2291and -1405/-1022)forthepromoteractivity.A1023如fragmentofOsgrp-2promoter (一1021to+2)fusedwithGUSwastransformedintotobaccoandprovedtobecapable ofconferringvascular-specificexpression. Inthisstudy,thepositiveregulatoryregionwasf