缺氧影响PTEN磷酸化和核定位.pdfVIP

2011正 4月 首 都 医 科 大 学 学 报 Apr．2011 第 32卷 第 2期 JournalofCapitalMedicalUniversity Vo1．32 No．2 [doi：10．3969／j．issn．1006-7795．2011．02．016] · 基 础 研 究 · 缺氧影响PTEN磷酸化和核定位 周云英 刘 华 郭锐翰 杨龙艳 卞伟华 贺俊崎 (1．首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系；2．首都医科大学2007级五年制基础医学专业基础医学班) 摘【要】 目的 观察缺氧(hypoxia)对第 1O号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶(phosphataseandtensionhomologdeletedon chromosometen，PTEN)磷酸化及核定位的影响。方法 以1％O 条件下培养的COS-7细胞为缺氧模型，在缺氧处理不同时间点 0、1、8、24、32h收集细胞 ，应用Westernblotting方法检测PTEN磷酸化水平及其下游信号分子磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated proteinkinaseB，p-Akt)的表达变化；分别应用细胞核、质分离技术，共聚焦显微镜观察缺氧24h前后 PTEN亚细胞定位的变化。 结果 COS-7细胞缺氧处理24h与未缺氧对照细胞相比，PTEN磷酸化水平显著降低 ，p-Akt亦明显减少 ；细胞核中PTEN表达量 则显著升高。结论 PTEN磷酸化水平和核质分布受到细胞缺氧的调节。在细胞缺氧反应中，PTEN去磷酸化而活化，通过抑制 其下游分子Akt磷酸化，从而抑制缺氧诱导的细胞增殖信号通路活化；并且部分人核发挥核内PTEN功能。 【关键词】 第 10号染色体缺失并与张力蛋白同源的磷酸酶；缺氧；磷酸化；亚细胞定位 【中图分类号】 Q71 EffectsofHypoxiaonPTENPh0sph0rylati0nandNuclearLocalization ZHOUrun．ying，LIU Hua ，GUORui．han ，rANGLong—yan ，BIANWei—hua ，HEJun．qi (1．DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，SchoolofBasicMedicalSciences，CapitalMedicalUniversity； 2．Five—yearProgramofBasicMedicalClasses，MajbrinBasicMedicalScience，CapitalMedicalUniversity) A【BsTRAcT】 objective Toinvestigatetheeffectsofhypoxiaonendogenousphosphataseandtensionhomologdeletedon chromosometen(PTEN)phosphorylationandnuclearlocalization．Methods COS-7cellswereculturedinhypoxiccondition(1％ O，) andharvestedat0，1，8，24，32h．EachlysatewasusedtodetectP— I’ENandPTENdownstream moleculeP．AktexpressionbyWestern blotting．SubcellularlocalizationofPTENwasobservedat0．24hwithhypoxictreatmentbynucleusandplasmaseparationmethodand confocalmicroscopy respectively． Results Upon hypoxic treatmentfor24 h，phosphorylated PrrEN leveldecreased significantly， accompaniedbyP．Aktexpressionleveldecrease：andnuclearPTEN levelincrease．Conclusion Inresponsetohypoxiatreatment．PTEN wasactivatedduetodecreaseofphosphorylatedfrr