青枯菌的色谱行为及其色谱峰组分的表征.pdfVIP

丫 672510 青枯菌的色谱行为及其色谱峰组分的表征 摘 要 本论文利用高效液相离子交换色谱体系，研究了世界上分布最广、危害最重且最难防 止的植物致病菌— 青枯菌的色谱行为，并结合各种细菌生理生化鉴定手段和细菌表面性 质研究方法探讨了青枯菌色谱行为的本质，主要内容包括四个部分: I、建立了青枯菌室温下的最佳色谱分离条件:青枯菌在pH8.0,0.02mol/L呱嗦一 盐酸缓冲液中，使用TOYOPEARLSuperQ650C(200mmX4.6mmi.d.)阴离子交换色谱柱， 在流速为lml/min，洗脱盐浓度为 lmol/L的NaCl，洗脱梯度为0-75%/30min的色谱 条件下，可获得良好分离的两个洗脱峰。 2、通过形态和生理生化性质分析，确定上样原液和分离得到的两个组分中的菌体都 是青枯菌，属于青枯菌生化工11型:对不同色谱组分重新上样后色谱行为的研究表明:两 个洗脱峰菌体是按照菌体表面电荷性质的不同而得到分离，是处于不同状态的青枯菌。 3、运用光学显微镜观察比较了二者的运动性:利用SDS电泳表征了两个组分 的菌体表面脂多糖、菌毛和鞭毛蛋白;使用疏水相互作用色谱 (HIC),碳水化合物的细菌 粘附性实验 (BATH)测定了两个组分菌体表面疏水性质;通过二者在TTC平板上的菌落形 态考察了它们致病性，并提取了两个组分的质粒。结果发现第一洗脱峰菌体的运动性与第 二洗脱峰菌体明显不同，其中前者的运动性是后者的4倍:第一洗脱峰菌体的菌毛鞭毛蛋 白量多于第二洗脱峰菌体，是其的2.7倍，表面疏水性是第二洗脱峰菌体的2倍;第一洗 脱峰菌体的致病性比第二洗脱峰菌体弱;两个色谱峰的菌体表面脂多糖没有明显区别，菌 体质粒都没有丢失。 4、对青枯菌不同生长时期的色谱行为进行了色谱跟踪表征，结果表明青枯菌第二洗 脱峰的成分比例随着培养时间的延长、菌体浓度的增加而增加，经培养 48小时后，菌液 的色谱表征只出现运动性较差的第二洗脱峰，这与前人报道的青枯菌在生长过程中运动性 逐渐降低的结果相一致。 实验表明利用高效液相离子交换色谱法可以将青枯菌处于不同状态的菌体分离，这种 研究方法将为阐明青枯菌的多态性及其在传代培养过程中致病性逐渐减弱的内在机理，并 最终研制出特效的青枯菌抗菌剂奠定基础。 关键词:青枯菌，高效液相离子交换色谱，细菌表面电荷，色谱组分分析 CharacterizationofRalstoniasolanacearum usingIon ExchangeHighPerformanceLiquidChromatographyand biochemistry analysisofitschromatogramcomponents Abstract Ralstoniasolanacearum,oneofthemostwidelyworlddistributedandeconomically importantplantpathogen,hasbeenstudiedbytheionexchangehighperformanceliquid chromatography(IE-HPLC).Thenthechromatogram componentsoftheseparationswere analyzedbysomebiochemistrymethods.Theinvestigationswerelistedasfollows: 1.TheoptimizedchromatographicconditionsofR.solanacearumaredetermined.The separationwasperformedonaTOYOPEARLSuperQ650C (200mmx4.6mmi.d.) column，usingamobilephaseo#0.02mo1/Lpiperazidine-chlorhydricacidbuffer(pH 8.0)ataflowrateofl.Oml/minandaelutiongradientoflmol/LNaClat0--75%/30 min.Undertheconditions，theR.solanacearum