MERSCoV实验室生物安全 采样送样要求(中东呼吸综合征冠状病毒(MERSCoV)实验室生物安全)..ppt

标准预防 视所有病人，均为具有潜在感染性的病人； 即认为病人的血液、体液、分泌物、排泄物、均具有传染性，必须进行隔离； 不论是否有明显的血液污染或是否接触非完整的皮肤与粘膜，接触上述物质者，必须采取防护措施。 * * 额外预防 接触疑似（具有重要流行病学意义的感染者）或确诊的患者，应在标准防护的基础上，针对传播途径增加防护 呼吸道防护（医用防护口罩，通风，负压病房等） 接触防护 （防护服与手卫生、环境卫生） 额外预防 以传播途径为基础的预防措施 * 根据导致感染的风险采取相应防护措施 接触患者的血液、体液、分泌物、排泄物、呕吐物及污染物品时应当戴清洁手套，脱手套后洗手。 可能受到患者血液、体液、分泌物等物质喷溅时，应当戴外科口罩或医用防护口罩、护目镜、穿隔离衣。 对疑似、临床诊断或确诊患者进行气管插管等有创操作时，应当戴外科口罩或医用防护口罩、医用乳胶手套、护目镜、防护面屏、穿防渗隔离衣。 外科口罩、医用防护口罩、护目镜、隔离衣等防护用品被血液、体液、分泌物等污染时应当及时更换。 正确穿戴和脱摘防护用品，脱去手套或隔离衣后立即洗手或手消毒。 * MERS-CoV感染标本采集对象 中东呼吸综合征冠状病毒感染疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究的确诊病例； 其它需要进行MERS-CoV感染诊断或鉴别诊断者。 * 标本采集要求 从事MERS-CoV检测标本采集的技术人员应经过生物安全培训，培训合格且具备相应的实验技能。在标本采集过程中，采样人员进行安全防护(采集人必须穿戴连体防护服、帽子、眼罩、N95口罩、脚套和手套)。 住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾控机构专业人员指导下采集。 密切接触者标本由当地疾控机构负责采集。 根据实验室检测工作的需要，结合病程再次采样。 * 采集标本种类和要求 呼吸道（上、下呼吸道）和其他样品（血清、尿液和粪便）、尸检标本。 每个病例应尽可能同时采集上、下呼吸道标本，下呼吸道标本最佳，建议同时采集粪便和尿液标本。 应尽可能采取发病初期和恢复期双份血清标本以确定是否感染，双份血清样品间隔14~21天采集比较理想，第一份血清应在发病第一周内采集。但单份样品的检测对于确定疑似病例也有价值，如果只能采集一份样品，应该在出现症状后至少14天采集。 * 标本管标识明确：患者姓名，性别，样品类型，检测指标，采样日期和送检单位；与样品送检单一致。 院内转运时，标本应该放置在耐用、防渗透的二级容器中进行转运。为减少任何标本破、漏的风险，不要使用任何气动传输系统来转运任何可能疑似患者标本。 转运至CDC的MERS-CoV标本应该充分包裹，转运时不能开盖或分装标本。标本转运应该符合三重包装系统要求：内层是主要的容器（一个可密封的标本袋缠绕以可吸收材料），第二层是防水、防渗漏的容器，外层是用于转运的包装。 MERS-CoV感染标本包装和运输 * * 　 MERS-CoV感染实验室检测方法 核酸检测：为目前早期诊断、早期发现MERS-CoV感染病例的主要检测方法，采用Real-time PCR 进行病毒核酸检测和诊断，患者呼吸道样本中扩增到特异性核酸，可确诊MERS-CoV感染 。传统RT-PCR因易出现污染使用受限，但可以获得病毒基因序列。 抗原抗体检测: IgM捕获法ELISA检测血清特异性IgM抗体 间接法ELISA或免疫荧光方法检测IgG抗体 利用假病毒进行中和抗体检测 * MERS-CoV的实验室检测靶标 目前病毒核酸的检测方法主要有：检测E蛋白上游基因（upE）、ORF1b、ORF1a 、 N2基因四种。 这些方法均高度敏感，推荐upE检测用于初筛;检测ORF1b基因的方法不如针对ORF1a的方法敏感，但比其更加特异;N2基因检测具有较高的灵敏性。 另外，已确定了中东呼吸综合征冠状病毒基因组中位于RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）和衣壳蛋白（N）基因的几个适合测序验证的靶序列。 * 待检样品 upE 特异性RT-PCR检测 阳性 阴性 ORF1a RT-PCR检测 阳性 阴性 确 诊 RdRp测序或N 测序 阴性 抗原检测 抗体检测 病毒分离 阳性 实验流程 * 继续采样，如有必要应送样至有MERS-CoV检测经验的参比实验室进行检测 入选病例 rRT-PCR upE基因进行筛查实验 阳性 阴性 rRT-PCR ORF1a、ORF1b或N基因区进行确证实验 阴性，但如果临床和流行病学证据充分，继续采样重复检测 阴性 阳性 RdRp或N区测序实验 阴性 显示为其他序列 显示MERS-CoV 确诊病例 确诊病例 * 谢谢！ * * * * * * 针对疫情的发展；不同级别的医疗机构应做相应的准备，因地制宜 患者离开后如何消毒，用什么消毒 谁不消毒等 医务人员的原则，减少暴露 常备不懈