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1999年全国兽医微生物学学术年会论文集 .135 .
的GPMV/QY97一I株F基囚3端RT一PCR产物 克降,叫取得较好效果
(长约。.S8kb)插入到载体质粒pGEM一1Easy的 本研究选择 厂鹤 1型禽副粘病毒GPMV/QY97
外源基因插入位点中,构成了重组质粒 T-GI- 一1株F基囚3端约 。.88kb的片段作为扩增对象,
MVF3,T一GPMVF3,用EcoR1酶切。可产生一条 对其进行克降鉴定后,下一步工作是对该基因片段
大小约0.S8kb的片段和一条与载体大小相同的片 进行序列测定,从而获取鹅 I型禽副枯病毒GPMV/
段 (约3kb)e用FP,/FP:一对引物对重组质粒T一 QY97一1株F基因序列,为了解禽副粘病毒F基因
GPMVF3进行PCR扩增,可获得大小约。.S8kb的 变异的t见律及在发病中的作用奠定基础。(本文图
片段,它与相应引物对GPMV/QY97 1株F幕因 略 )
组扩增的R丁一PCR产物大小一致。这些结果表明,
鹅 1型禽副粘病毒GPMV/QY97一1株F基因3 参考文献
端cDNA 片段 已正确插人到载休质粒PGEM一’I 1 卡尔尼克主编.禽病学(第 9版).高福,刘文军主
Easy中 译.北京:北京农业大学出版社,1991.127-
3 讨论 44呼
禽副枯病毒的基因组为不分节段负链单股 2 KontrimavichusLM ,AkulovA V,丁heveteri-
RNA,通过RT-ICR的方法获得 目的基因的cD narybulletin,1974.11(l):28
NA,获得高质量的基因组RNA是至关重要的。由于 3 Kosovac八,VesclinovicS.PoultyAbstract
基因组RNA在抽提时容易受到内源性及外源性 1988,14(4);28
RNA酶的作用而降解,或由干操作过程中的震荡而 4 ImadiMAAL.TanyiJ.Am Vet.Acad.Scicn.
断裂,因此,实验中创造无RNA酶的环境,以及通过 Tiara且mHungaricae,1982,30(1/3):3]一34.
超速离心纯化病毒,减少杂蛋白的污染,均有助手实 5 辛朝安,任涛,罗开键等,养禽与禽病防治,1997,
验获得成功。另外,使用病毒核酸抽提试剂盒,可以 1:5
确保获得纯度高、含量高的病毒RNA模板 6 殷震.刘Y华主编 动物病毒学(第 2I}Q),北京.:
本研究应用SUPERSCRIPTD反转录酶进行 科学出版社.1997.736一767,
鹅 1型禽副枯病毒GPMV/QY97一1株F基因3端 7 Gomta-]J,CornoG,SelleckPW.Virology,
cDNA第一链的合成,井用Expand-混合酶扩增 1990.177:339一351
RT产物。这些酶与常规的反转录酶及丁a4ffi相比 8 陈金顶,廖明,辛朝安.中国畜禽传染病,1998.2(1
具有产最高、错配率低、忠实性强等优点,从而为获 (增扫』):了组一751
得完整、准确的目的基因序列提供r可靠保证 克隆 9 1oyod.’]SakaguclhiT,HirotaHctal.Virolo-
采用pGEM-TEasy载体,这可使设计引物时省去 vv,1989,16:273 282
酶切序列,RT-PCR产物无须进行酶切而直接进行
传染性支气管炎病毒S:基因遗传变异研究
夕公红、份
常维山 张绍学 陈溥言 拜宝样
南京农业大学动物医学院 南京 2190D 山东农业大学动物科技学院 泰安271018)
摘 要 本文利月汁算机互联网络分祈了传染性支
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