传染性支气管炎病毒S1基因遗传变异研究.pdf

1999年全国兽医微生物学学术年会论文集 .135 . 的GPMV/QY97一I株F基囚3端RT一PCR产物 克降，叫取得较好效果 (长约。.S8kb)插入到载体质粒pGEM一1Easy的 本研究选择 厂鹤 1型禽副粘病毒GPMV/QY97 外源基因插入位点中，构成了重组质粒 T-GI- 一1株F基囚3端约 。.88kb的片段作为扩增对象， MVF3,T一GPMVF3，用EcoR1酶切。可产生一条 对其进行克降鉴定后，下一步工作是对该基因片段 大小约0.S8kb的片段和一条与载体大小相同的片 进行序列测定，从而获取鹅 I型禽副枯病毒GPMV/ 段 (约3kb)e用FP,/FP:一对引物对重组质粒T一 QY97一1株F基因序列，为了解禽副粘病毒F基因 GPMVF3进行PCR扩增，可获得大小约。.S8kb的 变异的t见律及在发病中的作用奠定基础。(本文图 片段，它与相应引物对GPMV/QY97 1株F幕因 略 ) 组扩增的R丁一PCR产物大小一致。这些结果表明， 鹅 1型禽副粘病毒GPMV/QY97一1株F基因3 参考文献 端cDNA 片段 已正确插人到载休质粒PGEM一’I 1 卡尔尼克主编.禽病学(第 9版).高福，刘文军主 Easy中 译.北京:北京农业大学出版社，1991.127- 3 讨论 44呼 禽副枯病毒的基因组为不分节段负链单股 2 KontrimavichusLM ,AkulovA V，丁heveteri- RNA,通过RT-ICR的方法获得 目的基因的cD narybulletin,1974.11(l):28 NA,获得高质量的基因组RNA是至关重要的。由于 3 Kosovac八，VesclinovicS.PoultyAbstract 基因组RNA在抽提时容易受到内源性及外源性 1988,14(4);28 RNA酶的作用而降解，或由干操作过程中的震荡而 4 ImadiMAAL.TanyiJ.Am Vet.Acad.Scicn. 断裂，因此，实验中创造无RNA酶的环境，以及通过 Tiara且mHungaricae,1982,30(1/3):3]一34. 超速离心纯化病毒，减少杂蛋白的污染，均有助手实 5 辛朝安，任涛，罗开键等，养禽与禽病防治，1997, 验获得成功。另外，使用病毒核酸抽提试剂盒，可以 1:5 确保获得纯度高、含量高的病毒RNA模板 6 殷震.刘Y华主编 动物病毒学(第 2I}Q)，北京.: 本研究应用SUPERSCRIPTD反转录酶进行 科学出版社.1997.736一767, 鹅 1型禽副枯病毒GPMV/QY97一1株F基因3端 7 Gomta-]J,CornoG，SelleckPW.Virology, cDNA第一链的合成，井用Expand-混合酶扩增 1990.177:339一351 RT产物。这些酶与常规的反转录酶及丁a4ffi相比 8 陈金顶，廖明，辛朝安.中国畜禽传染病,1998.2(1 具有产最高、错配率低、忠实性强等优点，从而为获 (增扫』):了组一751 得完整、准确的目的基因序列提供r可靠保证 克隆 9 1oyod.’]SakaguclhiT,HirotaHctal.Virolo- 采用pGEM-TEasy载体，这可使设计引物时省去 vv,1989,16:273 282 酶切序列,RT-PCR产物无须进行酶切而直接进行 传染性支气管炎病毒S:基因遗传变异研究 夕公红、份 常维山 张绍学 陈溥言 拜宝样 南京农业大学动物医学院 南京 2190D 山东农业大学动物科技学院 泰安271018) 摘 要 本文利月汁算机互联网络分祈了传染性支