十一株巨型艾美耳球虫（Eimeria+maxima）生物学与分子生物学特性的比较研究.pdfVIP

_ 少文摘要 川 十一株巨型艾美耳球虫 (Eimeriamaxima) 生物学与分子生物学特性的比较研究 摘 要 鸡球虫病是危害养鸡业的重大疾病，其防治长期以来以药物为主，但是耐药虫株 的不断出现，新药研制费用吊贵，尤其足药物残留肉蛋和环境危害人体健康，使得杭 球虫药的研制和使用受到限制，这也促使本病防治趋势由药物转向疚苗。目前，疫苗 的使用效果评价不一，这可能与田间株和疫苗株间的杭原相异有关.巨型艾美耳球虫 (Eimeriamaxima)是诱发鸡球虫病的3种常见球虫之一，具有很强的免疫原性，对 其它几种鸡球虫有部分的交又免疫力，故在各种研制的鸡球虫病疫苗中，巨型艾美耳 球虫是必不可少的虫种之一。但是，巨型艾美耳球虫的株免疫原性差异最显著，在田 间有时可因巨型艾美耳球虫免疫变异株的出现导致疫苗免疫失败.因此，疫苗的研制 和使用有赖于对各地虫株的分离和深入研究，特别是虫株的杭原语的分析及其分子基 拙的研究. 巨型艾美耳球虫在我国已有25个省、市或区报道，但有关其分子生物学的专项 研究尚未见有报道，可供研究的虫株也较少，在各地方株及疫苗株与田间分离株之间 的比较性研究国内尚属空白。为此，我们从江苏、安徽、山东、广东、福建、上海等 地田间及美国产球虫病疫苗中分离和建立了11株巨型艾美耳球虫，开展了本研究工 作，旨在阐明我国巨型艾美耳球虫的基本生物学特征;摸清在我国主要养禽地区巨型 艾美耳球虫的杭原谙，为这些地区球虫病疚苗的使用提供理论指导，尤其是为选用国 外进口疫苗提供科学依据;分析各地虫株间的亲源关系，探索杭原变异的分子基础; 为今后疫苗的研制和其它方面(咖坑药性、球虫免疫学、遗传学、分子生物学等)的 研究提供适宜的虫株;同时研究结果也丰富了鸡球虫病学的内容。 一、巨型艾美耳球虫地方分离株的建立与基本特征 采用单卵囊分离技术，从江苏、安徽、山东、广东、福建和上海等省市 10个地 区的鸡场及美国产球虫病搜苗(COCCNAC.D)中获得了11株纯种球虫，根据7 项指标鉴定11株纯种球虫均为巨型艾美耳球虫(EimeriamaximaTyzzer,1929).用 Duncan氏新复极差法对各株所浏数据均值进行多重比较，显示11株间存在不同程度 的差异，其中美国株与国内各株差异均显著 (P0.05)。用光镜和扫描电镜观察，11 株的卵囊结构相同，卵囊窄端的壁上有一卵膜孔。 十一株巨型艾美耳球虫 (Eimeriamaxima)生物学与分子生物学特性的比较研究 二、巨型艾美耳球虫地方分离株的致病性分析 用每鸡0.1二1护、1x100和10X1了个卵囊的剂量感染黄羽肉公雏，以平均增重 病变记分和死亡率为指标，测定11株巨型艾美耳球虫的致病性，结果显示11个虫株 均有致病性。各感染组的增重((0.1二1少组例外)与对照组相比均有显著差异(P0.5); 在感染10x10个‘ 只一，的荆量时，上海株增重最少，苏州株和龙岩株增重最多;扬州 株的病变记分最大，苏州株和龙岩株的最小，扬州株与苏州株之间有显著差异 (尸 0.5);扬州株、连云港株、福州株、广州株和美国株引起鸡死亡，死亡率分别为20%, 10%、10%、10%和10%.综合各项指标，扬州株和上海株致病性最强，苏州株和龙 岩株致病性最弱。 三、2株巨型艾美耳球虫的内生发育和病理变化 采用组织切片技术，对扬州株和上海株的内生发育过程、病理变化进行了研究. 结果显示:除发育阶段出现的时间不同外，扬州株和上海株间基本一致。有3代裂殖 生殖和1代配子生殖，裂殖体位于肠上皮细胞核的上方，第1代和第2代裂殖体寄生 于十二指肠和空肠前段的肠腺上皮细胞，第3代裂殖体寄生于十二指肠、空肠前段和 后段的绒毛顶端或两侧的肠上皮细胞。配子体寄生于肠绒毛上皮细胞和肠腺细胞核的 下方。接种后88h，无肉眼可见病变，在132一168h时病变最严重。显徽病变主要发 生于第3代裂殖生殖和配子生殖期，引起粘膜上皮细胞大量脱落、肠绒毛缩短等病变。 四、巨型艾美耳球虫地方分离株繁技力的比较分析 用i1株巨型艾美耳球虫抱子化卵囊100个 ·只一，或10000个 ·只一，经嗦嗽接种7 日龄或21日龄雏鸡，以麦克马斯特氏法对感染后第6一14天间每天24h排出的卵囊