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! 第五章 荧光检测器及检测方法 )’( 第五章 荧光检测器及检测方法 许多化合物有光致发光现象。化合物受到入射光的照射后，吸收辐射能，发出比吸收波长 长的特征辐射。当入射光停止照射时，特征辐射也很快地消失，这种辐射光线就是荧光。整个 电磁波范围内都可能产生这种辐射。液相色谱中的荧光检测器仅使用吸收紫外光或可见光而 发射的荧光。利用测量化合物荧光强度对化合物进行检测的液相色谱检测器就是荧光检测器 （ ）。 !"# 第一节 工作原理和仪器结构 一、工作原理 （一）荧光的产生 从电子跃迁的角度来讲，荧光是指某些物质吸收了与它本身特征频率相同的光线以后，原 子中的某些电子从基态中的最低振动能级跃迁到较高的某些振动能级。 图$ % & % ’ 光能的吸收、转移和发射示意图 ! " <$! 第四篇 液相色谱检测方法 电子在同类分子或其它分子中撞击，消耗了相当的能量，从而下降到第一电子激发态中的 最低振动能级，能量的这种转移形式称为无辐射跃迁。由最低振动能级下降到基态中的某些 不同能级，同时发出比原来吸收的频率低、波长长的一种光，就是荧光（图! " # " $ ）。被化合 物吸收的光称为激发光，产生的荧光称为发射光。荧光的波长总要比分子吸收的紫外光波长 长，通常在可见光范围内。荧光的性质与分子结构有密切关系，不同结构的分子被激发后，并 不是都能发射荧光。 （二）定量基础 在光致发光中，发射出的辐射量总依赖于所吸收的辐射量。由于一个受激分子回到基态 时可能以无辐射跃迁的形式产生能量损失，因而发射辐射的光子数通常都少于吸收辐射的光 子数，这里以量子效率 来表示：在固定的实验条件下，量子效率是个常数。通常 小于 ， ! ! $ 对可用荧光检测的物质来说， 值一般在 之间。荧光强度 与吸收光强度成正比： ! %&$ ’ %&( " （ ） （ ） " ) ! #% " # ! " # " $ 其中， 为入射光强度，为透射光强度， 即为吸收光强度。透射光强度可由朗伯 比耳 #% # #% " # " 定律求得： #% $ ) %& ) *+ ! # "-&.%. %& ! # ) #% , 因此 "-&.%. %& （ ! ） （ ） " ) !#% $ " , ! " # " - 当被分析物浓度足够低时（吸光度/ %&%#）