实验4 蛋白透析技术PPT.pptVIP

实验4 透析技术;4.1 膜分离技术;4.1.2 膜分离过程的分类：膜分离过程的实质是物质透过或被截留于膜的过程，近似于筛分过程，依据滤膜孔径大小而达到物质分离的目的，故而可以按分离粒子的大小分为以下几类：微滤、超滤、反渗透、透析等。;液体中可能存在的主要成分;（2）超滤（Ultrafiltration, UF）：分离介质同微滤膜，但孔径更小，为0.001~0.02 μm，分离推动力仍为压力差，截断分子量可变化。 特点：一种动态过程，由泵提供推动力，在膜表面产生两个分力：一个是垂直于膜面的法向分力，使水分子透过膜面，另一个是于膜面平行的切向力，把膜面截流物冲掉。适合于酶、蛋白质等生物大分子物质的分离、浓缩，超滤亲和纯化，血浆分离，脱盐，去热原，在生物工程中应用很广。;常规过滤(A)和超滤(B)的示意图 ;（3）反渗透（Reverse osmosis, RO）： 渗透：膜（不能透过溶质）两侧压力相等时，在浓度差作用下，溶剂从溶质浓度低的一侧向溶质浓度高的一侧透过的现象。渗透压：渗透现象中，促使水分子透过的推动力。 反渗透：在溶质浓度高的一侧施加超过渗透压的压力，使溶剂透过膜的操作。是一种以压力差为推动力，从溶液中分离出溶剂的膜分离操作，孔径范围在0.1~1 nm之间。 特点：基本原理为溶解扩散，在高于溶液渗透压的压力作用下，只有溶液中的水透过膜，而所有溶液中的大分子、小分子有机物及无机物全被截留住。主要用于海水脱盐，纯水制造以及小分子产品如乙醇、糖及氨基酸浓缩等。;4.2 透析原理;保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或者“透析液”。透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度、正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度、正比于膜的面积和温度，通常是4℃透析，升高温度可加快透析速度。 透析膜孔径5-10 nm，实验室常用透析袋，不适于大规模生物分离过程，但在生化实验室和医学上应用很广： （1）蛋白质的脱盐、去除变性剂、还原剂之类的小分子杂质； （2）也用于置换样品缓冲液； （3）在临床上常用于肾衰竭患者的血液透析。;表征透析膜性能的几个参数： 孔的性质(包括孔径、孔分布和孔隙度)、水通量、截留率、截断分子量、透析比、抗压能力、pH适用范围、对热和溶剂的稳定性。 截留率:膜对溶质的截留能力,以截留率R（rejection）来表示，其定义为： R＝1－ Cp／Cb Cp和Cb：表示在某一瞬间，透析液和保留液的浓度。 如R＝1，则Cp＝0，表示溶质全部被截留； 如R＝0，则Cp＝ Cb，表示溶质能自由透过膜。;MWCO（球状蛋白质）;4.3 透析操作;;;;透析注意事项： 实验前透析袋一定要检验是否漏液，防止样品流失。 必须经常换蒸馏水，以保证较高的透析度。 每次换蒸馏水时，都要检查透析袋是否漏液。 透析时间越长，透析出的盐离子越彻底，实验时间有限，只以时间作为衡量标准，一般检测透析的结果可以检测烧杯中盐离子浓度，当盐离子浓度很小以不影响实验时可停止透析。 两端的夹子夹的时候，距离不要太近，避免透析袋鼓的太紧，而使透析袋胀破。 蛋白溶解需要有一定的盐离子和缓冲溶液，所以最好用缓冲液代替水去透析，此外透析时蛋白浓度也不能太高。;4.4 透析技术实验设计;实验报告要求： 邮件主题：专业+姓名 Word文件名：编号+姓名+实验名称 如： 动物学-孙莹莹 1-孙莹莹-透析技术