蛋白质组学解析正常肝细胞与肝癌细胞DNA损伤修复相关复合物的研讨.pdfVIP

指导教师： 陈先 教授 指导小组成员： 杨艽原教授 张祥民教授 陆豪杰教授 ＼ 目录 摘要…………………………………”…”…………………………””””……………1 Abstract············…··············································································4 第一章前言………………………………………………………………………………8 l DNA损伤修复……………………………………………………………………………8 1．1细胞内主要的DNA损伤修复途径…………………………………………………8 1．2DNA双链断裂的损伤修复…………………………………………………………10 1．2．I引起DNA双链断裂的原因…………………………………………………………10 1．2．2DNA双链断裂的修复方式…………………………………………………………1I i．2．2．I同源重组(homologous end 1．2．2．2非同源末端连接(non—homologousjoining)…………………………13 1．2．2．3同源重组与非同源末端连接的比较…………………………………………14 1．3修复通路间的相互作用……………………………………………………………15 1．4DNA损伤修复与肿瘤的关系………………………………………………………16 2大规模蛋白质相互作用研究方法……………………………………………………17 2．1酵母双杂交…………………………………………………………………………17 2．2噬菌体展示…………………………………………………………………………18 2．3蛋白质芯片…………………………………………………………………………20 2．4串联亲和纯化技术…………………………………………………………………20 2．5基于质谱的稳定同位素标记技术…………………………………………………21 2．6基于生物信息学的分析方法………………………………………………………22 3本论文的选题目的及意义……………………………………………………………23 4参考文献………………………………………………………………………………26 第二章蛋白质组学解析H2AX相关的蛋白相互作用复合物的研究…………………42 I引言…………………………………………………………”………………………·42 2实验部分………………………………………………………………………………43 2．1化学试剂、细胞及抗体……………………………………………………………43 2．2稳定细胞株的构建…………………………………………………………………44 2．3稳定细胞株的鉴定…………………………………………………………………44 2．4细胞培养、体内标记及实验分组…………………………………………………45 2．5蛋白提取和蛋白复合物的纯化……………………………………………………45 2．6SDS考染及胶内酶解、提肽…………………………………………………46 0@@@oo D g…46 2．7酶解肽段的液相色谱分离………………………………………………6 2．8数据库搜索和蛋白鉴定……………………………………………………………47 2．9免疫印迹……………………………………………………………………………47 2．10激光共聚焦显微镜扫描…………………………………………………………48 2．11博来霉素刺激实验………………………………………………………………48 2．12肝癌动物模型的建立……………………………………………………………49 2．13免疫组织化学染色………………………………………………………………49 3结果与讨论……………………………………………………………………………50 3．i稳定