隐匿型乙型肝炎病毒S基因的克隆及其表达载体的构建研究.pdfVIP

隐匿型乙型肝炎病毒S基因的克隆及其表达载体的构建 王凡 (云南省第一人民医院检验科，昆明650032) 【摘要】 目的构建克隆载体，分析隐匿型乙型肝炎病毒S基因的突变情况，构建其原核 融合蛋白表达载体，为开发新的HBV疫苗及新的HBsAg检测试剂打下基础。方法首先以 DNA， ELISA法检测乙型肝炎病毒标志物(HBVM)，以实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测HBV 检出两例HBVDNA阳性的标本，即隐匿型HBV感染；同时采用分子克隆技术，通过PCR扩 增获得隐匿型HBVS基因，限制性核酸内切酶EcoRl、Pstl双酶切目的基因及质粒载体PUCl8， 进行体外重组，转化感受态大肠杆菌DH5Q，筛选阳性重组体，并对阳性重组体进行目的基 B-HBVS 因的序列分析；亚克隆PUCl8一HBVS基因重组体，构建原核表达载体pThiohis 基因重组体，转化感受态大肠杆菌TOPIO，并筛选阳性重组体。结果筛选到两例隐匿型乙 型肝炎病毒感染的样本，其HBVS基因的克隆载体与原核表达载体均构建成功，序列分析没 有发现S基因突变。结论采用实时荧光定量PCR检测HBVDNA，辅助诊断HBV隐匿型感染 是可行的，定量检测重组体HBVDNA，可以鉴定阳性重组体，并可直观地显示克隆增殖情况； B-HBV 成功构建HBVS基因的克隆载体，并在国内首次成功构建融合蛋白表达载体pThiohis S基因重组体，期望高效表达nBsAg，为今后的基础研究和临床应用奠定基础。 【关键词】HBV隐匿感染：克隆载体；表达载体：HBVS基因 its Theclone ofS intheoccult BVirusinfectionandconstructed analysisgene Hepatitis vector fan prokaryoticexpressionWang ConstructtheclonevectorofS intheoccult BVirus [Abstract]Objective gene Hepatitis itsmutationsandconstructits orderto vector,in infection，Analysis prokaryoticexpression newHBVvaccinand used Firstly,weEnzyme-linked develop diagnosisreagents．Methods immunodasordent determinetheHBVmarkersandFluorescence assay(ELISA)to quantitive chain measureHBV theHBVS polymerasereaction(FQ—PCR)toDNA；secondl5 gene amplified with