Zn金属硫蛋白间接竞争型ELISA的建立与应用.pdfVIP

要 ELIsA以其快速、准确、安全、简便的特点而成为定量测定生物体内微量有机 物的理想方泫。木实验的爵的就是为了建立一套快速、有效、方便并熊定量测定猪 偶联后，作为人工抗原，对昆明小鼠皮下注射。首次免疫时抗原中MT量分别为8ug／ 前3次免疫时采用的是弗氏完全佐剂乳化，后3次免疫采用弗氏不完全佐剂乳化。 两批小鼠拥强免疫的肘间隔分别为lO日和14且。用免疫双扩教方法测定抗血清效 原量加倍，加强免疫间隔时间为10日时，其免疫效果较佳，可使大部分小鼠抗血 清效价达到l：16以上。 2．抗体的纯化及鉴定；将效价达到l：16以上的MT小鼠抗血清用饱和硫酸铵 盐析法浓缩出Y一球蛋白，然后用DEAE—sephadexA50层析柱分离提纯IgG。实验 中发现洗脱液pH值为7．4时洗脱第一峰即为纯化的IgG，用不连续缓冲系统聚丙 烯酰胺凝胶浓度梯度龟泳鉴定层析洗脱下的!gG达到屯泳纯。对纯化后的IgG进行 辣根过氧化物酶标记，用直接ELISA鉴定其为MT的特异性抗体。 品时其结果不够稳定。同一样品所对应的oD值相差较大，此方法仅适合于样品中MT 定性检测；采用间接竞争型ELIsA测定样品，0D值比较稳定。用方阵滴定法确定了 时间为3hr。用标准MT，采用间接竞争型ELIsA方法拟合的标准曲线回归方程为： 建立的间接竞争型ELIs^具有特异性强、灵敏度较高、稳定性和重复性好、适合于 大批量样品的检测等优点，不失为对MT进行定量分析的一种有效方法。 关键词：金属硫蛋自抗体：金属硫蛋自：闼接竞争型￡LIsA；阐接菲竞争型 ELIsA；免疫 Abstract an ELISAisbecomingoptimalmeFhodthatcoulddeterminethe quantum of in becauseofits organiccompoundorganism speediness， and The ofourresearchwastoestablisha sensitivity．purpose setof detemined metallothioneinins再in8’s c。f『Ipleteassay quantu讯。f body． 1．the anLiseruminmiceofMTwhichwasdist“ledfrom polyclonal swine therarefiedwas wasprepared：AfterMT—11 tocarrier BSA coupled protein as meansof wasactedrnan—made by GD，theprotein—haptencunjugates antigen． Kun micewere subcutaneousthe withthecarrier Ming injected by antigen ofBSA．Andeach hadthe1everofMTin we