大额牛精液的低温冷冻保存——蔗糖、乳糖和葡萄糖的低温冷冻保护效果比较.pdfVIP

大额牛精液的低温冷冻保存 — 蔗糖、乳糖和葡萄糖的低温冷冻保护效果比较 文端成 (广州医学院实验动物研究中心.广州 5)0)82) 季维智 杨上川 门红升 施立明 中〔国科学院昆明动物研究所，昆明 650223) 摘 要 以运动度冷冻复苏率、金黄地鼠裸卵穿透和精子低渗膨胀试验作为检侧指你。分别比较 了乳糖、蔗特和菊萄璐对大倾牛精子的低温冷冻保护效果。结果表明，不同的摘对大额牛精子的 低温冷冻保护存在差异，乳搪的冷冻保护效果显著优于蔗箱，蔗据显著优于荀萄特，乳褚和蔗箱 配合使用时，其冷冻保存效果又显著优于只有乳特或蔗精时的冷冻保护效果;摘类对精子的低沮 保护作用主要是糖类对精子质膜的低温保护，糖是一类较好的质腆低沮冷冻保护剂。 关镇词 大额牛 精子 蔗特 乳箱 葡萄按 低沮冷冻保存 精液的低温冷冻保存在动物的遗传育种，疾病的控制和生物多样性的保护上都有极其重 要的意义 (GouldandStyperek,1989;Coulter,1992)。甘油、卵黄和塘类是冷冻保存牛属 动物精液时常用的低温保护剂。由于多数糖类是能被细胞分解代谢的无毒物质，因此，它们 的低温保护作用特别受到T人们的关注 (Deleevwetal.，1993，Chenetal.，1993;牧人等， 1997)。大额牛 (Bosfrontalis)又名独龙牛，是一种耐粗饲，抗逆性强，肉质细嫩，但还处于 半野生、半家养状态的肉用牛品种;是一种有待于进一步开发，极有推广前景的珍稀地方品 种 (施立明，1992)，本研究于1993年至1996年通过比较几种搪的低温冷冻保护效果，探索 适合于冻存大额牛精液的冷冻液配方，为利用和保护这一优良品种资像提供技术资料。 1材料和方法 1.1精液的冻存 4头性成熟的大额牛公牛购自云南省福贡县，经一段时间的饲养和调教后，在生殖季节 (春秋两季)用A.V.(artificialvagina)采精，每头公牛每周采精2^-3次，精液作常规检测。 选择运动度高于60%的精液用于本实验。冷冻液的配制参照陈建春 (1994)描述的方法进行。 经常规检查，符合要求的精液用预热的冷冻液按7:10作一次稀释，精液稀释后在室温 下平衡1小时，再转入4C的冰箱中平衡3小时。精液的冷冻参照Tade等 (1990)和Molinia 等 ((1994a)所描述的方法进行，简述如下:把平衡好的精液按每滴约100K1迅速滴在CO:干 冰块上，在干冰块上冻结5分钟或更长时间，再把冻结的精液迅速转入到液氮中保存。每颗 冷冻精液用lmlPBS(pH7.2)，在37℃的水浴中解冻，镜检精子活力。 1.2冷冻精液的品质评定 1.2.1冻精的运动度冷冻复苏率 (MRR) 冻存的精液在复苏后，检测精子的运动度。 917 MRR%二 (解冻后精子的运动度/冷冻前精子的运动度)x100肠 表t 六种冷燕浦的胡成 一 ，一 叫一 -一一 ，一 组 分 — 一 冷 冻 液 LGY SGY GGY LSGY SGGY LGGY 乳抢 (mal/L) 蔗特 (nwl/L) 荀萄铸 (mol/L) 睡100m1防冻液中含卵黄20ml，甘油6g，用Tris调节pH到7.20.加青祥素10OU/ml.硫酸链母素l00pg/ml 1.2.2 金黄地鼠裸卵穿透试验 (SPA) (1)超数排卵和裸卵制备 金黄地鼠裸卵穿透参照陈建春等 ((1994)所描述方法进行。8^-12周龄的雌性金黄地鼠， 每只腹腔注射PMSG (天津实验动物中心制)40IU,49^-53小时后。再每只腹腔注射hCG (SigmaChemicalCompay,St.Louis,MO6317BUSA)40IU。注射hCG后12^-17小时脱颈 推处死地鼠，剪开腹腔，把输卵管连同子宫角的一小段剪下，置