改良TRIzol法高效提取东北林蛙皮肤总RNA.pdfVIP

野生动物 ChineseJournalofWildlife2012，33(3)： 二 改良TRIzol法高效提取东北林蛙皮肤总 RNA 王丹丹 肖向红 吴立舒 柴龙会 张晶钰 张建平 (东北林业大学，哈尔滨，150040) 摘要：目的：建立一种从两栖动物皮肤组织中提取高质量总RNA的方法。方法：改良传统 TRIzol法，提取皮肤总 RNA，紫外分光光度计测定 RNA纯度和得率，1．1％琼脂糖凝胶 电泳检测其完整性。结果：改良方法提取的总 RNA，其A260／A280值在 1．8—2．1之间，A260／A230大于2：琼脂糖凝胶 电泳显示清晰的28srRNA和 18srRNA条 带，且28srRNA条带亮度约为 18srRNA的2倍。结论：改良TRIzol法提取的总RNA纯度高、完整性好、杂质少、 得率大，易于操作掌握 ，可以用于相应的分子生物学试验。 关键词：东北林蛙；皮肤；总RNA提取 ：改良TRIzol法 中图分类号：Q955 文献标识码：A 文章编号：1000—0127 (2012)03—127—03 An ImprovedTRlzolM ethodtoExtractTotalRNA from SkinTissue ofRanadybowskii WangDandan XiaoXianghong WuLishu ChaiLonghui ZhangJingyu ZhangJianping (NortheastForestry r5ity，Harbin，150040，China) Abstract：OurobjectivewastodevelopamethodforextractinghighqualitytotalRNAfromamphibianskintissue．Weextrac— tedtotalRNA rfom theskinofDybowskifrogusingamodifiedtraditional TRIzolmethod．Weassayedthepurityandyieldof theRNA byUV spectrophotometer．WeexaminedtheintegrityoftheextractedRNA by1．1％ agarosegelelectrophoresis．The A260／A280ratiosofRNA extractedbyourmodifiedmethodrangedfrom 1．8to2．1，andtheA260／A230ratiosweregreater than2．Agarosegelelectrophoresisshowedclear28srRNA and18srRNA bands，andthebrightnessof28srRNA bandsWas approximatelytwicethe18srRNA．WeconcludethatthepurityandintegrityoftotalRNA extracted byourimprovedTRIzol method werehigherthanthatexrtactedbythetraditionalTRIzolmethod ：thetotalRNA hadfewerimpuritiesnadtheyieldswere large~Themodifiedmethod Was easiertoimplementandcanbeusedinrelevantmolecularbiologytests． Keywords：Ranadybowskii；Skin：ExtractingtotalRNA；ImprovedTRlzolmethod 皮肤被覆于动物体表 ，直接与外界环境接触 ，是机 两栖类代表物种东北林蛙 (Ranadybowskii)的皮肤为试 体的一种重要组织，主要有5种功能：光防护、体温调 验材料，对传统TRIzol法进行改良，摸索出了高效提取 节、表皮循环、免疫和屏障作用 。此外，