大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系的建立.pdfVIP

泸州医学院学报 2012年 第 35卷 第 l期 JournalofLuzhouMedicalCollege Vo1．35 No．1 2012 38 大鼠肾脏组织蛋白质组双向电泳分离体系的建立 米 张春燕 ，刘 寒 ，杨 烨 ，陈 燕 ，邬丽莎 ，赵春玲 (泸州医学院：生物化学教研室 ；电教 中心 ；。生理教研室 ，四川I泸州 646000) 摘 要 目的：建立大 鼠肾脏组织蛋 白质组双 向电泳分离体系。方法：提取大 鼠肾脏组织的样品蛋白，按标准条件对蛋白质进 行双向电泳分离，并对各个关键因素进行优化 。结果：最终选择的裂解液配方是 1％TBP，4％CHAPS，0．2％Bio—Lyte，40mmol／L Tris．8mol儿 尿素。2mol／L硫脲：使用pH 4~7的IPG胶条进行被动水化上样，等 电聚焦采用缓慢升压模式，电泳参数根据Bio～ IKad公司的顸设方案进行调整 ：改 良硝酸银法进行蛋白质斑点染色。从而获得 了满意的蛋 白质组双向电泳 图谱 。结论：成功建立 具有较高分辨率和重复性 的大鼠肾脏组织蛋白质组双 向电泳分离体系 ，为后续实验研究提供有力的技术保障。 关键词 双 向电泳 ；蛋 白质组 ：大 鼠；肾脏组织 中图分类号 Q503 文献标识码 A 文章编号 1000—2669(2012)1-0038—03 ESTABLISHMENT oFTW o—DIM ENSIoNAL ELECTROPHoRESIS SYSTEM FoR PRoTEoMESFRoM RAT KIDNEY TISSUE ZhangChunyan，etal DepartmentofBiochemistry,LuzhouMedicalCollege Abstract0bjective：Toestablishasystemoftwo—dimensionalgelelectrophoresis(2一DE)forseparationof Droteomesfrom ratkidneytissue．Methods：Proteinswereextractedfrom ratkidneytissueaftertheirlysing，and separatedby2一DE in standardconditions．andimportantexperimentalparameterswereoptimized．Results：The 1ysisbuffercontaining 1％TBP。4％CHAPS，0．2％Bio—Lyte，40mmol／LTris，8mol／L urea and2mol／L thiourea wasapplied to extractproteinsfrom tissues．Thepassiverehydration schemeofsampleswasused tohelp the separationoflargemolecularweightproteinsintheIPG ge1．ElectrophoresisparametersrecommendedbyBio—Rad Corporationwereadjustedadequately．Intheprocessofsilverstaining，asufficientwashingoperationensureda weakbackgroundof2一DEmaps．Conclusion：Underaboveoptimizedconditions．the2一DE separationsystem for proteomesrfom ratkidneytissuearesuccessfullyestablished．whichwillguaranteethefurtherexparimentalstudy． Keywords Two—dimensionalgelelectroDh0resis：Proteome；Rat；Kidneytissue 双 向电泳 (two～dimensionalelectrophoresis