环境细胞微生物学 第五章.ppt

第五章微生物的生长及其控制 生长 微生物在适宜环境条件下不断吸收营养物质，进行新陈代谢。当同化作用大于异化作用，微生物细胞质量不断迅速增长，称为生长。 繁殖 当单细胞个体生长到一定程度时，由一个亲代细胞分裂为两个大小、形状与亲代细胞相似的子代细胞，使得个体数目增加，这是单细胞微生物的繁殖。 发育 从生长到繁殖这个由量变到质变的过程叫发育。 个体生长 个体繁殖 群体生长 群体生长=个体生长+个体繁殖 可以其重量、体积、密度、浓度作为衡量指标 第一节 微生物生长的测定 第二节 微生物的生长规律 第三节 影响微生物生长的主要因素 第四节 微生物培养法概论 第五节 微生物生长的控制 第一节 微生物生长的测定 一、微生物的纯培养 二、微生物生长的测定 （一）微生物细胞数目的测定 （二）微生物生长量的测定 （三）丝状微生物菌丝长度的测定 一、微生物的纯培养 微生物学中将在实验室条件下从一个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。 纯培养的分离，是研究和利用微生物的第一步，是微生物工作中最重要的环节之一。 1、稀释倒平板法 将待分离的材料作一系列的稀释(如1：10、1：100、1：1000、1：10，000……)， 分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至45℃的琼脂培养基相混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，保温培养一定时间即可出现菌落。 如果稀释得当，平皿上就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 2、划线法 将已熔化的培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，用接种环沾取少许待分离的材料，在培养基表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物将随着划线次数的增加而分散，经保温培养形成菌落。 3、单细胞挑取法 这种方法是从待分离的材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养。具体方法是将显微镜挑取器装置在显微镜上，把一滴菌悬液置于载玻片上，用安装在显微镜挑取器上的极细的毛细吸管，在显微镜下对准某一个单独的细胞挑取，再接种到培养基上培养。此法需要非常熟练的操作人员，多限于高度专业化的科学研究中采用。 4、利用选择培养基分离法 不同微生物需要不同的营养物质。有些微生物生长适于酸性环境，有些则适于碱性环境。 各种微生物对不同的化学试剂如消毒剂(酚)、染料(结晶紫等)、抗生素及其他物质等具有不同的抵抗能力。 对一些生理类型比较特殊的微生物，为了提高分离机率，往往在涂布分离前先进行富集培养，其目的是提供一个特别设计的培养环境，以帮助所需的特殊生理类型的微生物的生长，而不利于其他类型微生物的生长。 微生物纯培养分离方法的比较稀释平板法 既可定性，又可定量，用途广泛 平板划线法 方法简便，多用于分离细菌 单细胞挑取法 局限于高度专业化的科学研究 利用选择培养基法 适用于分离某些生理类型 较特殊的微生物 二、微生物生长的测定 微生物特别是单细胞微生物，体积很小，个体的生长很难测定，而且也没有什么实际应用价值。因此，在微生物学的研究和应用中，通常是测定群体的增加量，即群体的生长。 测定不同种类、不同生长状态微生物的生长情况，需要选用不同的指标。通常对单细胞微生物来说，既可测定细胞数目，又可测定生长量；而对多细胞微生物(尤其是丝状真菌)，则常以菌丝生长的长度等作为生长指标。 （一）微生物细胞数目的测定 测定微生物总数－－直接计数法 1、计数板计数法（常用） 2、电子计数器计数 3、染色涂片计数 4、比浊法 活菌计数－－间接计数法 1、MPN法 2、过滤计数法 3、平板菌落计数法 测定微生物总数 2、电子计数器计数 在一个小孔的两侧各放置一个电极，有物体通过，电阻会发生变化。 当细胞悬液通过小孔时，每通过一个细胞，电阻就会增加并产生一个信号，计数器就对该细胞自动计数一次。 测定微生物总数 3、染色涂片计数 用0.01mL吸管吸取定量稀释的细菌悬液均匀涂布于刻有1cm2面积的计数板上，经固定、染色后，在显微镜下观察几个视野并计数，取平均值，按公式计算每毫升原液的细菌数。 测定微生物总数 4、比浊法测定细菌悬液细胞数 原理：单细胞微生物的悬液浓度与浊度成正比，与光密度成反比。细胞数越多，浊度越大，透光度越小。 可用分光光度计测定细菌悬液的光密度或透光度 也可用浊度计测细菌悬液的浊度 要先用平板菌落计数法制作标准曲线 测定活细菌数 MPN法（最大可能数，多管发酵法）P418 测定活细菌数 过滤计数 含菌量少的水样，可用0.45um的滤膜过滤。将膜置于平板上培养得到菌落，计数。 平板菌落（CFU）计数