高压力诱变的产高效生物絮凝剂的普鲁蓝菌变异株的筛选及鉴定研究.pdfVIP

材料科学 高压力诱变的产高效生物絮凝剂的 普鲁蓝菌变异株的筛选及鉴定 任何军 吉林大学环境与资源学院，长春，130026 摘要以普鲁蓝菌(AureobosidiumPullulans)为出发菌株，采用高压力处理对其诱变，通过 筛选获得了一株产生物絮凝剂活性明显提高的变异株PB3201，其发酵液絮凝活性比出发菌 株提高了近12．4％．同时运用生理生化分析，rapd技术，对出发菌株和变异株pb3201进行 了遗传差异鉴定研究，结果表明，出发菌株和变异株之间，存在明显差异，说明高压处理是 有效的诱变手段，其变异最终是基因突变的结果，为进一步研究高压对微生物的影响及作用 机制提供了理论参考． 关键词生物技术；高压力；生物絮凝剂；诱变 高压技术在物理学，材料科学和化学领域有着广泛的研究与应用，随着高压生物学的发展，高压对生 物大分子和生物系统作用理论的拓展，极大地促进了高压技术在生命科学领域的广泛应用，诸如生物大分 子结构，修饰酶催化机制，微生物代谢途径和基因表达的改变，多肽的合成及疫苗研制等n’21。生物絮凝 剂是利用微生物发酵产生的新型，廉价的水处理药剂，在工业领域有着广泛的应用。1。国内外对运用高压 技术进行微生物诱变育种报道极少，本文旨在通过高压诱变，筛选生物絮凝剂高产菌株，并进一步为研究 高压对微生物的影响提供理论参考。 1材料和方法 1．1菌种 Aureobasidiumpullulans由吉林大学基础生物实验中心保存。 1．2培养基 1．2．1液体培养基 6．0。 硫酸铵0．49／L，磷酸二氢钾29／L七水硫酸镁19／L，氯化钠lg／L，酵母膏29／L，蔗糖le,m，pH 1．2．2固体培养基 液体培养基加15--一209琼脂 1．3主要仪器与试剂 sk2492，购自上海生物工程有限公司。其他试剂均为国产分析纯。 1．4方法 1．4．1高压诱变方法 741 中国科协第四届优痔博士生学术年会论文桑 菌滩5mL分装5个无苗的EP管中．每管ImL．并用无菌封口膜封口，保证管中无气泡。留取一管做常压 常压对照和压力处理过的茁液中分；慨取100uL稀释10倍后再各自吸取100儿涂布平扳，于恒温培养箱 中28c同步培养20h。 l 4．2高压前后菌体形态观察 99／LNacLj弁液母浮沉淀，用此悬浮液制片．1％美蓝60s染色后观察，拍照‘”。 14 3絮凝活性测定^法 在250mL三角艟中加入5000mL 液的上清液OD5椭。值作为对照．通过0现∞删值减少来确定絮凝程度，用絮凝率来表示絮凝活性． 絮凝率(％)=(A—B)／A×100％ A：不加发酵液的上清液ODj50n。值；B：加发酵波的上清液OD5so衄值 IA．4生理生化性质分析 生理生化用培养基91：淀粉琼脂培养基、明腔液化培养基、纤维素水解培养基、酪素水解培养基、啦s 培养基、vP试验上f}养基．等量接入02mL蒴液。 IA5 RAPD扩增 162儿，10xbuffer2．5”L1．8pL iO碱基引物s卜s45由上海生物工程有限公司合成。反应体系：ddH20 uL M$CL2(20mmo儿)2．0uLdNTP(2．0mmoVL)1．0uL州m州lO哪oI∞n5 (2听镕)反应条件t 凝胶电泳，凝胶成像系统成像。 2结果和讨论 2．1变异株筛选 在高压处理后的再生平板上挑取大苗落，圆形中间隆起．表面光滑乳白色，黏稠，直径2rim左右的单 苗落，通过絮凝活性测定初缔．在320MP处理组中得到9株絮凝荆台成能力较出发菌株有所提高的变异 菌株．提高幅度均在lo％咀上．对这9株菌进行复筛发现只有l株菌能在三轮复筛中维持较高的絮凝稳定 性，其他的8种菌株絮凝刺合成能力均不同程度下降．对这个菌株传代5次．发现有较高的遗传稳定性， 絮