骨髓间充质干细胞与视网膜色素上皮细胞的蛋白质组学比较研究.pdfVIP

塑蕉匡型 堂堂塑 2012December JF ． v。146N。 ujianMedUniv … ’’… 375 骨髓间充质干细胞与视网膜色素上皮细胞的蛋白质组学比较 洪 玉 ，徐 国兴 摘要 ： 目的 采用蛋白质组学的方法 比较骨髓 间充质干细胞 (BMSCs)和视 网膜色素上皮细胞(RPE)中蛋 白 表达 的差异 。 方法 对 BMSCs和 RPE细胞采用 2D-DIGE双 向电泳技术获取差异的蛋 白点 ，并对其进行 MAL— DI-TOF—MS分析、鉴定 ，相应蛋 白数据库信息检索和功能分析 。WesternBlot对其 中2种差异蛋 白进行验证 。 结果 在 BMSCs和 RPE细胞鉴定出31个差异表达蛋 白，其中BMSCs细胞有 23种蛋 白表达 明显上调(主要包括 SPARC、PCNA、HSP27)，RPE细胞有 8种蛋 白表达 明显上调 (主要包括 TBP)，建立 了BMSCs与 RPE细胞的差异 表达蛋 白谱 。WesternBlot实验进一步验证 了蛋 白质组学结果 。 结论 SPARC、PCNA、HSP27、TBP蛋 白在 BMSCs和 RPE细胞中具有明显表达差异，为进一步研究BMSCs诱导分化为 RPE细胞提供了基础数据 。 关键词 ： 间质干细胞 ；色素上皮，眼；细胞学；蛋 白质组学 中图分类号： R329．24；R322．91；R394．3 文献标识码 ： A 文章编号： 1672—4194(2012)06—0375—05 骨髓问充质干细胞 (BoneMesenchymalStem (ABI48OO，美 国 GE公司)；激光扫描仪 (Typhoon Cells，BMSCs)是 目前理想 的组织工程视 网膜细胞 9400，美 国GE公司)；转膜仪 (英国AmershamBio— 的种子细胞 ，BMSCs具有来源丰富，取材简便 ，遗传 sciences公司)。 背景稳定 ，多向分化潜能及移植时不存在组织配型 1．2 方法 及免疫排斥 问题等优 点_】]。国内外很多学者对 1．2．1 BMSCs和 RPE培养 将人 BMSCs和 BMSCs进行诱导分化为类视 网膜色素上皮细胞 RPE细胞株分别置于MSCM 及 10 FBS+1640培 (retinalpigmentepithelium，RPE)。为了全面 了解 养液中，放在37℃、体积分数为0．05的CO饱和湿 两种细胞 的形态、结构和功 能差别 ，本研 究 比较 度的培养箱孵育。每 3d换液，当贴壁密度达到 BMSCs和 RPE细胞 中蛋 白表达的差异 ，在蛋 白水 80 ～85 时，用 0．25 胰蛋 白酶消化 ，并分别按 平进一步阐明这两种细胞结构和功能的差异 ，对今 照 1：2及 1：4传代培养。 后研究体外 BMSCs向RPE细胞诱 导分化 ，以及应 1．2．2 2D—DIGE及 MALDI-TOF—MS分析 用 BMSCs治疗眼底视 网膜色素变性疾病具有理论 1．2．2．1 蛋 白质提取 分别收集 BMSCs及 RPE 指导意 义。 各 1×1O个 。提取蛋 白质步骤如下 ：去培养液 ，PBS 冲洗细胞 3遍，用细胞裂解液 Alklysisbuffer(LB) 1 材料与方法 裂解细胞 ，行冰上超声 。破碎核酸 ，12000r／min， 1．1 材料 第二代 BMSCs细胞株 (美 国 sciencell 4℃离心 20min，收集上清液 。加入丙酮一2O℃沉 研究实验室)；第二代人 RPE细胞株 (上海锐聪科技 淀过夜 ，然后 12000r／min，4℃离心 20min沉淀。 发展有 限公司)；MSCM (美 国 sciencell研究实验 根据 2D-Quant试剂盒 的指示 进 行蛋 白质含量 室)；21)-