检测鲍曼不动杆菌及肺炎克雷伯菌对替加环素药敏性的三种方法评价.docVIP

精品论文 参考文献 检测鲍曼不动杆菌及肺炎克雷伯菌对替加环素药敏性的三种方法评价 曹正欣1 阴晴2 　　（1江苏大学附属医院输血科 212001；2江苏大学附属医院检验科 212001） 　　【摘要】目的 评价三种体外药敏试验检测鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌对替加环素敏感性的结果差异。方法 用微量稀释法（Vitek 2 Compact 系统GN-16卡）、KB法（纸片扩散法）及MTS法(MIC Test Strip)检测临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌和耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对替加环素的敏感性，并将检测结果进行对比分析。结果 纸片扩散法和微量稀释法（Vitek 2 Compact）检测泛耐药鲍曼不动杆菌及耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对替加环素的体外敏感性结果存在差异。对于泛耐药鲍曼不动杆菌：纸片扩散法与MTS法的符合率为96.4%，高于Vitek 2法的78.6%。对于耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌：纸片扩散法与MTS法的符合率为75%，低于Vitek 2法的91.7%。结论 对于鲍曼不动杆菌，纸片扩散法为首选，当Vitek 2法的测定结果为耐药时，建议使用纸片扩散法进行验证。对于肺炎克雷伯菌，Vitek 2法的测定结果较纸片扩散法更为可靠，如需验证，还应使用MTS法。 　　【关键词】替加环素 药物敏感试验 鲍曼不动杆菌 肺炎克雷伯菌 　　【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）22-0082-02 　　近年来，临床抗感染治疗面临的挑战不断增加。由多重耐药菌引起的院内感染严重影响了医疗安全和患者安全，作为抗生素生产和使用大国，耐药感染性疾病已成为我国临床感染性疾病死亡的主要因素。替加环素（tigecycline,TGC）是一种新型半合成甘氨酰四环素类广谱抗生素，能够克服或限制细菌的外排泵和核糖体保护两种耐药机制产生作用，具有良好的抗菌活性[1]。国内临床微生物实验室多采用纸片扩散法及Vitek 2 Compact 系统进行细菌耐药性分析，为此本研究用Vitek 2 Compact 系统、KB法（纸片扩散法）及MTS（(MIC Test Strip）法检测泛耐药的鲍曼不动杆菌和耐碳青霉烯类的肺炎克雷伯菌对替加环素的敏感性，并将药敏结果进行对比分析，评价三种方法的可靠性。 　　1 材料和方法 　　1.1 菌株来源 　　1.1.1 质控菌株：铜绿假单胞菌ATCC27853，大肠埃希菌ATCC25922 　　1.1.2 实验菌株：江苏大学附属医院2014.1.1至2014.4.31从住院病人临床标本分离出的 28株泛耐药鲍曼不动杆菌和2013.1.1至2014.4.1分离出的12株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（排除重复菌株）。其中痰标本 35例，分泌物标本2例，尿标本1例，血1例，其他部位1例。 　　1.2 药敏试剂 　　替加环素纸片（15ug/片）：由辉瑞制药有限公司惠赠 　　替加环素MTS纸片（0.016～256ug/mL）：由辉瑞制药有限公司惠赠 　　Vitek 2 Compact GN鉴定卡、GN16药敏卡:购自法国生物梅里埃公司 　　水解酪蛋白琼脂平板（M-H平板）：赛默飞世尔生物制品有限公司 　　哥伦比亚血平板：赛默飞世尔生物制品有限公司 　　1.3 方法 　　1.3.1 Vitek 2 Compact 系统 　　挑取单个新鲜菌落，在含2ml无菌生理盐水的试管接近液面的管壁上研磨，并蘸取少量生理盐水与之调和，使细菌均匀分布于生理盐水中，用麦氏比浊管调整为0.5麦氏浊度单位的菌液（相当于每毫升1.5亿细菌数）,用Vitek 2 Compact全自动鉴定仪配套的药敏卡进行药敏试验，操作严格按照仪器说明书进行，仪器自动给出最小抑菌浓度MIC值。 　　1.3.2 KB法（纸片扩散法） 　　按照美国CLSI推荐的操作方法，挑取单个新鲜菌落，在含2ml无菌生理盐水的试管接近液面的管壁上研磨，并蘸取少量生理盐水与之调和，使细菌均匀分布于生理盐水中，用麦氏比浊管调整为0.5麦氏浊度单位的菌液（相当于每毫升1.5亿细菌数）,用灭菌的棉拭子蘸取菌液均匀涂布于MH平板上，室温放置15min,待平板上的水分被完全吸收，将药敏纸片贴在琼脂表面,35℃培养16-18h,用游标卡尺量取完整抑菌圈直径，抑菌圈边缘以肉眼看不到细菌明显生长为限。 　　1.3.3 MTS法 　　挑取单个新鲜菌落，在含2ml无菌生理盐水的试管接近液面的管壁上研磨，并蘸取少量生理盐水与之调和，使细菌均匀分布于生理盐水中，用麦氏比浊管调整为0.5麦氏浊度单位的菌液（相当于每毫升1.5亿细菌数）,用灭菌的棉拭子蘸取菌液涂布于M-H平板上，将