产肠毒素性大肠杆菌基因工程疫苗研究现状研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 产肠毒素性大肠杆菌基因工程疫苗研究现状 卫广森1，许崇波2，孙 宇3 (1中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州730000；2大连大学生物工程学院， 辽宁大连1160003；辽宁省辽阳市动物防疫站，辽宁辽阳111000) 产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)是引起幼畜腹泻的主要病原菌。ETEC具有两类致病因子：一类为肠毒素， 主肠道粘膜的上皮细胞上，从而大量繁殖，产生大量肠毒素，由肠毒素造成肠黏膜上皮细胞的病理性变化，导 致幼畜腹泻…。ETEC所致的幼畜腹泻在我国广大养殖地区流行十分广泛，发病率和死亡率都很高，即便是 病愈存活的幼畜，其生长发育和生产性能也会受到严重影响，给畜牧业造成了极其严重的经济损失。对由 ETEC引起的腹泻，国内外长期采取药物治疗方法，但由于耐药菌株的产生，药物治疗效果一般不甚理想，免 疫预防则是一条非常有效的途径怛J。目前国内外对黏附素和肠毒素进行了基因工程疫苗的研究，均取得了 很好的成果，现将有关研究进展情况介绍如下。 1 大肠杆菌Ks8一K9。双价基因工程疫苗 洪孟民等b。4 酶BamHI酶切，再用T4 DNA重新 制备预防仔猪黄痢的疫苗。孙玉昆等bJ在妊娠母猪产前21d左右注射该K88一K99双价基因工程疫苗，母猪 分娩后测定初乳中的K8¨K99抗体，结果表明，初乳中存在K踮、K鲫高效价抗体，仔猪吮吸初乳后，能够有效地 阻止ETEC的感染。1985～1987年间，免疫母猪7555头，产仔猪80753头，腹泻发病率为1．92％，死亡率为 0．35％；对照组母猪402头，产仔猪6001头，腹泻发病率为24．98％，死亡率为6．88％。随后，顾大年等№o报 道了幼畜腹泻双价基因工程菌(Ks¨K99)的高密度发酵和抗原蛋白疫苗的生产工艺。这样制备的疫苗不含 菌体，不需要甲醛处理，抗原蛋白保持了天然空间结构，有利于诱导产生抗体。同时这种冻干制剂可以长期 保存，便于贮藏和运输，解决了疫苗应用中的“冷链”问题。 陈章水等[7娟J亦构建了K黯一K99双价基因工程菌株，该菌株具有同时产生K88、K鹎两种表面抗原的能力， 其表达水平已达到或超过野生供体菌株，血凝效价达到25～26左右。用该菌株制备的疫苗免疫妊娠母猪 猪通过吮吸初乳获得Ks¨K∞两种保护性抗体后，在肠道黏膜产生局部免疫保护，阻止产肠毒素性Ks¨K∞菌 毛型大肠杆菌的黏附定居，从而达到预防腹泻的目的。该疫苗在全国各地猪场，接种免疫了近10万头妊娠 母猪，观察了近100万头仔猪的临床免疫效果，发病率比对照组下降85％以上，基本控制了仔猪黄痢的发生。 考虑到本菌在重组K9。基因时，作为选择标记的Amp抗性基因(抗氨苄青霉素基因)未去掉，当本菌株与其它 菌株接触时，有可能将Amp抗性基因传递给无此抗性基因的菌株，发生有害基因的扩散。为此，孔令达等旧J 开展了K踮一K舯工程菌株基因质粒在动物体内外扩散性试验研究。结果表明，采用皮下接种法，基本上排除 了细菌发生直接接触的机会，对防止有害基因扩散无疑是一个积极措施。细菌在猪体内的消长试验证明，皮 下接种本菌后，细菌被局限于接种部位，不会扩散到血液。若由于使用不当，发生疫苗散落于体外，进入消化 道，则可能造成质粒的扩散。然而从猪的模拟试验结果看，质粒的扩散现象并未得到证实。分析原因有两 个：一是质粒接合转移机率不高，这点在试管内的接合试验已被证实；二足工程菌是实验菌株，比较脆弱，对 动物宿主具有不适应性，从粪便排菌率很低就证明了这一点。因此，工程菌的应用不会成为新的污染源，对 ·--——309·--—— ofthe of of and Science Branch,Chinese Proceedinss Biolo#cal Veterinary 10山Symposium Asso—c—iationAn——im—a—l 生态环境不会产生人们所预想的不良影响。另外，刘兴汉等‘10-¨1还