高效液相色谱法在食品快速检测中的应用研究.pdfVIP

高效液相色谱法在食品快速检测中的应用 胡滨陈一资胡慧民 (四川农业大学食品系雅安市625014) 摘要：高效液相色谱是吸纳了液相柱层析法和气相色谱法的优点进行改进和发展起来的现代分析方法，具有分离速 度快、检测效率高、重现性好的特点。近年在食品检测上应用后，扩大了检测范围，提高了分析水平，尤其对食品 中残留的微量、痕量有毒有害物质N-亚硝胺、多环芳烃、杂环芳烃、芳香胺、偶氮化合物、黄曲霉毒素、农药残留、 药物残留等，能快速、准确地分析出来，进一步提高了食品卫生质量，保障了食品安全和人民身体健康；促进了食 品出口。高效液相色谱法在食品检测中有广泛的应用前景。 关键词：高效液相色谱、食品、快速检测 Pressure 高效液相色谱法又称做高压液相色谱法(High Liquid 是近年来迅速发展起来的一项新颖的分离技术，应用于食品安全指标快速检测取得良好效果。 高效液相色谱法是在原有的液相柱层析基础上，引入气相色谱理论，并加以改进和发展起来的。 u 它与液相柱层析不同之处在于应用了颗粒直径小(5～10m)的高效层析柱填充剂，以及配Hj了高 压输液泵、高灵敏度检测器和自动扫描收集装置，从而使它在分离速度上比起液相柱层析要快数十 倍至数百倍。该方法不仅分离速度快、检测效率高，而且自动化程度达到了气相色谱法水平。同时 又保持了液相色谱法对试样适用范围广，移动相改变的灵活性大和便于大量制备的优点。高效液相 色谱法由于兼备液相和气相两种色谱分析方法的优点，近年来在食品检测上应用并飞速发展。HPLC 法已增补进中华人民共和国食品检测国家标准方法(GB／T5009．1996)。近年，在保健食品功效成份、 营养强化剂、维生素、色素、香料、农药残留等方面的检测也得到了广泛的应用。世界上约有80％ 的有机化合物可以用HPLC来分析测定。 一、 高效液相色谱分析原理： 高效液相色谱法是在高压条件下物质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换 的过程，它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同引起排阻作用的差别使不同 溶质得以分离。 用R表示总分离度，液相色谱柱的分离效率用下列公式表示。 R_百(了)(雨)胛“‘ 式中 k=分配系数=芸秦嚣墓震 a=分配系数，即两个组分分配系数的比={2 k1 从公式可见，要提高总分离度，有三条途径： (1)改变k对正相色谱来讲，移动相极性增高，k减小，色谱峰向前移，分离度降低：移动相 极性减小，k增加，色谱峰的流出时间增加，同时峰形变宽，分离度提高。改变K有效范围以ak5 为宜，k过大，不但分离时间拖得很长，而且峰形变坦，影响分辨率和检出灵敏度。 (2)增加rl在其他条件相同的情况下，增加n使色谱峰变狭。这点可以通过增加柱长来达到， 但分离时间增加，若采用高效能的填充剂，不仅提高了分离度，而且能使J“峰形变狭而提高检出的 灵敏度。 ’ (3)增加a使后一组分相对于前一组分的保留时间增加米提高分离度。这点可通过改变移动相 或固定相的组成来达到。从改变a来提高分离度较为理想，但实际操作比较困难。行之有效的办法 是改变移动相的极性。这就是高效液相色谱中通常采用连续改变移动相极性的梯度淋洗法。 二、高效液相色谱仪 高效液相色谱仪型号很多，但主要部件和结构系统相同，装置示意图如下： 1．高压输液泵 在高效液相色谱中，由于采用了颗粒直径很小的色谱柱填充剂，要使淋洗液以一定的流速流过 2，压力均匀、流量稳定。 色谱柱，必需使用高液泵。一般压力150～250kg／clII 2．梯度淋洗(梯度洗脱) 梯度淋洗就是将两种或两种以上不同极性溶剂，在分离过程中按一定的比例匹配混合， 以连续改变淋洗液的极性，通过载液中极性的交化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。 3．色谱柱 高效液相色谱法所用的色谱柱一般采用内壁抛光的优质不锈钢， 压力低于70 2也可用厚