高效液相色谱有机相整体柱的制备初探与牛膝多糖硫酸酯的毛细管电泳分析研讨.pdfVIP

摘 要 本论文的工作包括两部分: 第一部分的内容为高效液相色谱有机相整体柱的制备初探 整体柱 (又名连续床)作为色谱学与材料化学相结合的产物，是在柱管内以原位聚 合的方式形成用于分离分析的多孔介质。整体柱具有制备相对简单、原料易得以及聚合 组分在一定范围内可调节的优点。另外，整体柱的孔隙率大，可以减小流动阻力和路径 扩散，从而提高柱效。 本论文选择聚甲基丙烯酸缩水甘油酷体系进行整体柱实验研究。首先考察了原位聚 合制备整体柱基质的条件。实验显示，提高聚合温度会增强整体柱基质的机械强度并升 高使用时的柱压，电镜扫描的结果也可以证明提高聚合温度会导致整体材料孔径变小; 延长聚合用混合物的放置时间会造成整体柱基质的柱效下降。还考察了柱管的材质和尺 寸对柱效的影响以及数种溶剂对整体材料的溶胀/收缩的影响。对所制备的10cm长度的 柱子，以小分子化合物做样品初步评价整体柱基质的柱效，一般在400NTP/10cm以上， 最佳情况下接近2000NTP/10cma 在聚合条件考察的基础上，用不同的试剂对整体柱基质衍生化制得6种整体柱:用 BF3Et20催化声环糊精 (声CD)与整体柱基质之间的在柱衍生化反应制备了冬CD整 体柱，以红外光谱、元素分析和高效液相色谱三种手段对键合整体柱的结果进行了确认 和表征;在井CD整体柱的基础上进一步通过在柱苯甲酞化反应获得苯甲酞化的乒CD 整体柱;借鉴介CD整体柱的制备方法，获得了轻丙基一声环糊精 (HP一CD)整体柱。 另外，整体柱用二乙胺衍生化后，得到弱阴离子交换整体柱;通过酸水解整体材料上的 环氧基团制备亲水的二醇柱;用BF3Et2O催化正丁醇与整体材料之间的反应制备了疏 水的C;柱。 对衍生化得到整体柱的性能考察实验显示:在等度洗脱条件下，二乙胺化整体柱用 含0.25mol/LNaCl的。01mol/LTris-HCI缓冲液 (pH7.6):乙睛=10:1作为流动相可 以分离牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(CEA)。在所用实验条件下，声CD整体柱和 苯甲酞化的卜CD整体柱对安息香等六种手性样品没有明显的拆分迹象，HP一CD整体 柱对安息香对映体有一定的拆分能力。 实验证明，整体柱基质在衍生化之后(例如，HP一CD整体柱、二醇柱和C;柱)， 都会不同程度地降低小分子样品在柱子中的保留体积，说明介质的表面改性在一定程度 上可以消除有机骨架与小分子之间的相互作用。实验显示，优化流动相消除两者之间的 非特异性相互作用，可能会改善整体柱的性能。-CD类整体柱的分离结果还显示有机 整体柱具有分离小分子样品的潜力。 第二部分的内容为牛膝多糖硫酸醋的毛细管电泳分析研究 牛膝多糖 (AbPS)是从中药牛膝中提取的含量较高的小分子量果聚糖。药理实验 显示，牛膝多糖硫酸酷 (S-AbPS)有较强的抗病毒活性，梭甲基牛膝多糖 (CM-AbPS) 和牛膝多糖磷酸酷 (P-AbPS)也显示出较好的抗肿瘤活性。对AbPS衍生物的研究开发 需要测定样品的衍生化取代程度。 本论文利用毛细管区带电泳直接分离了S-AbPS,CM-AbPS,P-AbPS样品。使用未 改性柱和聚丙烯酞胺改性柱，分别考察了不同的电泳缓冲液对样品分离的影响。使用未 改性柱，S-AbPS样品中不同荷质比的组分可以获得初步分离。该方法可用于检测 S-AbPS,P-AbPS和CM-AbPS样品的主成分，但因为灵敏度和基线问题，难以用于AbPS 及其衍生样品含量的准确测定。 为了提高检测灵敏度和扩大线性范围，进而测定衍生样品的取代程度。实验通过酸 水解后再衍生化的方法获得了所需的结果。在衍生化试剂的考察实验中，通过分析四种 氨基蔡磺酸类衍生化试剂对岩藻糖的衍生能力、反应体系中含水与否对反应的影响和反 应时间与转化率的关系，选定衍生化试剂为7-氨基蔡一1,3一二磺酸 (ANDS)并确定衍生 实验条件。实验显示:经ANDS衍生化后，8种标准中性单糖可以被分离:低分子量肝 素混合样品也可以在衍生化后被分离检测。经ANDS衍生化，AbPS和S-AbPS的酸水 解产物可以完全分离。实验测定S-AbPS和AbPS的检测限分别为9.22X10-3mg/mL和 7.42X10-4mg/mL，故该法可用于测定S-AbPS的取代程度。实际分析S-AbPS样品，显 示出S-AbPS中的单糖被不同程度硫酸化的比例在99%以上。 关键词:整体柱，聚合反应，,B-CD，牛膝多糖，毛细管区带电泳