NADase细菌毒素的活性测定研究.pdfVIP

第27卷 增刊 卫 生 研 究 Vol.27 Supplement 126 1998年 JOURNALOFHYGIENERESEARCH Aug. 1998 NADase细菌毒素的活性测定 ‘ 金晓琳 黎庶 胡福泉 (第三军医大学基础部微生物教研室，重庆 400038) 摘要 旨在建立一种测定NADase细菌毒素活性的非放射性测定法。本方法建立了一个NAD 辅〔酶 I)依赖的显色系统，在该系统中，NAD接受乳酸脱氢酶(LDH〕从乳酸脱下来的氮，再通过 PMS(吩嗓二甲酪硫酸盐)传递给INT(碘化硝墓四氮哇蓝)，使后者还原而显色。如果NADase毒素 分解NAD,就会打断递氢链而抑制显色反应。结果:显色系统中，NAD含量与显色有良好线性关系 (R=0.9898).绿脓杆菌外毒素A分解NAD而抑制显色反应。以毒素含量为自变量，以毒素对显 色反应的抑制为应变量，建立了对数线性回归方程y=12.5x0当‘y=50%时〔即显色系统中的 NAD有半数(250ng)被分解〕x=207(ng),定义分解IngNAD的毒素活性为一个单位。则207ng 毒素含有25。个毒素活性单位该方法的测定敏感性达到n“g”水平，表明本文建立的方法是一种敏 感的测定NADase细菌毒素活性的非放射性测定方法。 关钮词 NAD畴细菌毒素 活性 QuantitativeAssayofNADaseBacterialToxins AnXiaolin,LiShu,HuFuquan (DepartmentofMicrobiology,TheThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing 400038,China) TheauthorsdevelopedaNAD-dependentcolorproducingsystem,inwhichNAD received 2H degeneratedfrom LDHsdecomposing lactate,andpassed them throughN-methyl phenazaniummethylsulfate(PMS)toiodonitrotetrozoliumchloride(INT),thereducedINTpro- ducingcolor.IfPseudomonasaeruginosaqexotxinA,aNADasebacterialtoxin,wasusedtotreat NAD 王first,thecolorproducingrea。士ionwouldbeinhibitedsinceNAD,H-carrier,wash梦 drolyzed.Takingthecontentoftoxinsasindependentvariable,andtherateofcolorproducinginhi- bitionbytoxinsasdependentvariable,log-linearregressionformulary=12.5,:0,`6wasdeduced. Wheny=50%,thatmeansahalfofNADinreactionwasdecomposed，二二207(ng).Theactivity oftoxinhydrolyzingIngofNADwasdefinedasaunit,then207ngofthetoxinusedinthereac- tionhad250units.Theresultsindicatedthatthemethodisasensitivenonradioisot