N乙酰鸟氨酸脱酰基酶活性中心的研讨.pdfVIP

onActivesiteof Study N-acetylornithineDeacetylase DissertationSubmittedto of NanjingUniversityTechnology in fulfillmentof partial requirement forthe of degree Masterof Engineering By QiupingWeng Wei Supervisors：Prof．Ping Li Asso．prof．Huan 2008 Apr 摘要 deacetylase， 特异性，能立体拆分消旋化氨基酸生产L．氨基酸。此外，对该酶的研究还具有理论意义和 潜在的医药应用价值。迄今为止尚无NAOase三维结构的相关报道。 且酶活爽∞表现依赖于锌离子的存在。 接区相连。酶的活性中心位置由4个p折叠形成中空，外绕6个长度不等的0【螺旋，呈环 螺旋中的氨基酸相互作用，形成一个细小狭长且深的口袋，为底物专一结合区。该处主要 能是底物结合位点。 本文通过对酶活性中心的金属离子的结合的研究，验证了NAOase确实是金属酶。制 各SDS．PAGE电泳纯的纯酶是研究前提。NAOase是胞内酶，对于100mL10％的菌悬液， 骤。 其次，酶反应体系中金属离子的存在确实对酶活力有较大的影响。C02+对酶活力有明 IIIIIlllllllllll IIIIIIIIIIIIIIIIJI IIIIII 度的Mn2+对酶活有促进作用。 的金属酶。Zn2+在酶分子内的作用类似于氨基酰化酶中，既维护酶分子活性部位的特定空 间结构又参与酶和底物的反应过程，起电子传递作用。自然酶、C02+脱辅酶及C02+重构全 酶活力的对比实验证明了C02+不参与活性中心的组成，可能在活性中心外起到传递电子和 稳定酶分子构象的作用。 ． 第四，考察酶活性中心重要氨基酸的组成及它们在活性中心的位置确定。采用苯甲基 化中心。 综上所述，本文综合多种生物信息学软件预测得NAOase为金属酶，其活性中心Asp， 本文在序列和结构分析的基础上对保守氨基酸进行化学修饰，提高了化学修饰的针对性， 同时从序列和结构的角度对化学修饰的结果进行合理的解释。 关键词：Ⅳ-乙酰鸟氨酸脱酰基酶结构预测化学修饰活性中心底物保护 Ⅱ ABSTRACT TheE．coli usedin ar