Salusin-α仅转染血管平滑肌细胞对ACAT1和SA—R表达的调节作用研究.pdfVIP

矗■Ⅱ掌 杂志，2013，23(1)：18—20 ⑥ 2013 CHINESEJOURNALOFMICROCIRCULATION doi：10．3969／j．issn．1005—1740．2013．01．006 Salusin-a转染血管平滑肌细胞对ACAT1 和 SA—R表达的调节作用 毛晓露 曹淑彦 廖 华。王宇学，* [中图分类号] R543．3 [文献标识码] A [文章编号] 1005—1740(2013)01—0018—03 现的Salusins基因是一种心血管活性肽 ， 国)，DMEM(Gibco公 司．美国)；DAB显色试剂盒 含相关肽分子 Salusin-a和 Salusin-13，分别 (KPL公司 ，美 国)；Lenti—Pac 慢病毒包装试剂盒 28个氨基酸和 2O个氨基酸组成 ，是编码 (GeneCopoeia公司，美 国)；脂质体 (InvivoGen公 扭转 蛋 白 2A (Torsin Family 2，MemberA， 司。美国)，其它试剂 由北京 中生北控生物科技股份 TOR2A)基 因的选择性剪接产物 ¨1]。Salusin—a和 有限公司提供。 Salusin—B均具有促进血管平滑肌细胞 (VSMCs)和 1．2 实验方法 成纤维细胞有丝分裂 的作用。Salusin-a可抑制人 1．2．1 构 建 pcDNA3．1-Salusin—a—EGFP和 psi 巨噬泡沫细胞形成 ，Salusin-~则对其具有明显促进 HIV—U6一Salusin—a质粒 ：按分子生物学标准操作流 作用 ～ 。Iso等 、Watanabe等 。报道冠状动脉 程l7将 Salusin-a基因克隆入含有 EGFP(绿色荧光 狭窄患者血清 Salusin-a水平显著低于轻度高血压 蛋 白)报告基因的哺乳动物表达载体 pcDNA3．1和 患者和健康志愿者 ，且急性冠状动脉综合征 (ACS) 含有 U6启动子 的慢病毒 RNA干扰载体 psiHIV— 患者血清 Salusin—a水平下降与动脉粥样硬化 (AS) U6，构建 pcDNA3．1-Salusin—a—EGFP质粒和 psi— 程度一致 ，表 明 Salusin—a可能具有抑制 AS的作 HIV—U6一Salusin—a质粒 ，扩增 、纯化鉴定 ，存储备 用。为了进一步阐明Salusin—a抗 AS机制 ，通过促 用。psiHIV-U6一Salusin-a的干扰靶序列为 5，_TCC 进和抑制 Salusin—a表达 ，探讨 Salusin-a对乙酰辅 GGCACTGCGTGCTCA 3’。按试剂盒说明书 酶A 乙酰转移酶 1(ACAT1)及清道夫受体 (SA— 包装 psiHIV-U6一Salusin-a质粒 ，收集病毒颗粒备用。 R)表达的影响，为其抑制 VSMCs泡沫化和 AS提 1．2．2 质粒转染与分组 ：将VSMCs悬浮于含 15 供实验依据 。 胎牛血清 (FBS)的DMEM培养液中，分装于直径为 60ram培养皿中，加入oxLDI(20ug／m1)诱导试剂 ， 1 材料与方法 37℃，596／CO：培养 。待细胞生长密度达到 7O ，按 1．1 实验试剂 照细胞克隆筛选法_7用脂质体转染两种质粒入 ACAT1和 SA—R抗体 (Cayman公司 ，美 国)； VSMCs，继续培养 48h，提取 蛋白备用 ，蛋 白提取按 Salusin—a抗体 (PhoenixPharmaceuticals公司 ，美 照 Western—blotting试剂盒说明书进行 。对照组分 国)；氧化低密度脂蛋 白(oxLDL)(协生生物科技有 为：CO组 ：培养 VSMCs，不作任何处理 ；C1组 ：转 限责任公司，中国)；pcDNA3．1一EGFP质粒 (Gene— 染 pcDNA3．1一EGFP质粒 ，培养 VSMCs；C2