姜黄素对腹膜透析相关性腹膜炎大鼠腹膜TLR2，TLR6及TNFα表达的影响.pdf

·中文论著摘要· 姜黄素对腹膜透析相关性腹膜炎大鼠腹膜TLR2， TLR6及TNF．Q表达的影响 目 的 腹膜透析相关性腹膜炎是腹膜透析过程中最常见的并发症。在腹膜透析相关 性腹膜炎中，以革兰氏阳性菌感染为主。病理改变主要表现为腹膜层单核巨噬细 胞浸润和腹膜间皮细胞外基质的沉积，最终导致腹膜透析失败。因此，如何对其 进行防治一直是临床研究的热点。Toll样受体(Toll．1ikereceptors，TLRs)是一类可 molecular 以识别保守的病原相关分子模式(pathogenassociatexl paRems，PAMPs)的 跨膜受体，是机体天然免疫的重要组成部分。通过对PAMPs的识别，TLRs在机 体抵御病毒及病菌感染的过程中发挥重要的作用。迄今为止，在人类中鉴定出10 性菌成分肽聚糖(peptidoglycan，PGN)和质膜酸(1ipoteichoicacid，LTA)的识别有关。 necrosis 肿瘤坏死因子(tumor factor,TNF)是80年代发现的巨噬细胞和单核细胞分 泌的一种重要的细胞因子。具有多种生物效应，主要是介导抗肿瘤及调节机体的 免疫功能，并且参与炎症病变的多方面病理生理变化。姜黄素是一种从姜科植物 Curcuma longa的根茎姜黄中提取的一种植物多酚，有抗氧化、免疫调节、抗炎、 抗凝、抗肿瘤、抗突变等多方面的药理作用研究表明，姜黄素作为一种免疫调节 剂可以调控T细胞、B细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、NK细胞等免疫细胞的活 性与数量。姜黄素也可在一些炎症中下调一些炎性反应因子，如肿瘤坏死因子 necrosis (tumor 因此，本实验旨在研究姜黄素对表皮葡萄球菌所致的急性腹膜炎过程中TLR2、 TLR6和TNF—a的表达的影响。 材料与方法 一、实验分组 SD大鼠，雌雄并用，共72只，体重250．3009，随机分为2组，姜黄处理组 和无姜黄处理组。每组内动物再分为6小组，除第1组给予等量生理盐水外，其 in 余各组动物给予表皮葡萄球菌腹腔注射(107／ml units，diluted colony．forming 8小 3．86％dialysate)$iJ作急性腹膜炎模型。姜黄处理组在腹腔注射皮葡萄球菌前l h后过量麻药 时给予姜黄素腹腔注射(1‘mg／kg)。实验动物存活3，6，12，24和48 处死，取腹水及眼血做常规腹水及血常规检测；取出腹膜处理备用。 二、检测方法 1、腹膜的组织学改变 将切片置于苏木精染色液中15．20min，自来水冲洗；后切片置于O．5％HCL 酒精中数秒，自来水洗3次后稍浸泡；切片置于伊红染色液中2-3min。切片脱水， 中性树胶封片，光镜下观察结果。 2、免疫组织化学检测 实验动物麻醉后，常规灌流、固定、取材、切片，3％H20210min，BSA封闭 育lh，DAB显色， 3、TLR2、TLR6和TNF—a的蛋白质表达 过量麻药处死动物，迅速取大脑并剥离海马，样品剪碎后加入裂解液40C过 夜。考马斯亮蓝法进行蛋白定量，各组取等量蛋白，聚丙酰胺凝胶电泳分离，并 夜(40C)；二抗常温下孵育2h；后进行显色、曝光、胶片扫描、定量分析。 4、TLR2、TLR6和TNF．0【的mRNA表达 采用Trizol一步法提取大鼠腹膜总RNA，然后进行逆转录。采用引物为：TLR2 GGTGTTGGATGT TGAAGGGTGGGTC一