三疣梭子蟹受精过程的初步观察研究.pdfVIP

中国甲壳动物学会编辑 甲壳动物学论文集 第四辑 讲学虫肛缸2003年出版 TRANSACTIONSOFTHECHINESECRUSTACEANSOCIETYNo．4 PP．430～433 三疣梭子蟹受精过程的初步观察。 朱冬发 王春琳 余红卫 陈 丹 (宁渡大学生命簪}学与生物工程学院，宁渡3152ll。E．mail：dfzhu@mail．nbptt．zj．C11) 摘要：通过光镜和组织切片技术，对三疣梭子蟹的受精过程进行了初步的观察。三疣陵子 蟹的成热卵母细咆处于第一次减数分裂中期，其纺锤体长轴的旋转过程可以开始于卵巢中。 卵子排出后，其纺淫体长轴一般与质膜垂矗。精子入卵引起卵子激活，成热分裂过程继续 进行，由纺缍丝牵引着染色体向两圾移动，外侧的染色涔由质膜包裹形成第一圾漆。排卵 后约3h，次级卵母细咆排出第二极体。单倍的堆核重建成雄原核，雌核形成雌原核．雄原 核的形成早于雌原核。22～25℃水温下，排卵后约5h，雌雄原孩通过联会形成合子核： 关键词：三疣睃子蟹 受精过程细胞学 近年来，国内外学者对于十足目甲壳动物受精生物学进行了较深入的研究(Lee eta1．，1991；堵南山等，1992；蔡难儿等，1997；吴长 Yamazaki，1989；Damrongphol 子蟹的受精细咆学过程的报道。三疣梭子蟹作为我国一种著名的大型经济蟹种，分布 广、经济价值高。本文对三疣梭子蟹受精过程进行初步的细胞学观察，旨在丰富十足目 甲壳动物发育生物学理论，同时通过分析第一极体和第二极体形成、排放的时间以及合 子核分裂的时间，为三疣梭子蟹多倍体的诱导研究提供理论指导。 一、材料和方法 1．实验材料和暂养 三疣梭子蟹购于浙江省象山县石浦沿岸，暂养于宁波市鄞州区成祥镇兴旺苗场，培 养的水温为22～25℃。观察正在排卵的蟹，抓起后发现其抱卵量已经接近正常，但尚 有一些卵没来得及抱紧子腹部。此时我们开始取样，以后按一定时间间隔取样固定。 2．样品处理、分析 将取到的样品用Bouin’s液固定12个小时，然后移入70％酒精中保存。系列浓度 酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片。切片的厚度为7～8脚，H．E染色，Olympus BFl2显微镜观察拍照。 ·浙江省自然科学基金资助项目、(No．301213)。 ·432· 二、结 果 1．三疣梭子蟹卵核的变化与精子人卵 成熟卵巢中的卵母细胞已开始进行减数分裂，此时的卵母细胞处于第一次减数分裂 中期，纺锤体已形成，染色体排列在赤道板上。卵子纺锤体的长轴大多数与质膜平行． 但同时也看到了少数卵子的纺锤体以较大斜角对着质膜，说明在卵巢中纺睡体已开始旋 转，与海水及精子的刺激均无关。 成熟卵母细咆排入海水后，排出的卵母细胞仍处于第一次减数分裂中期，但此时纺 锤体长轴已与质膜相垂直(图1．1)。卵子入水后，卵黄膜演化形成壳膜，有些精子还 见附着在壳膜外，不能再进入卵子。精子入卵后，刺激卵子继续进行减数分裂。排卵后 约6min卵核处于第一次减数分裂后期，染色体被纺锤丝牵引向两极移动，将排出质膜 外的孩物质即为第一极体的核物质染色体(图l一2)。排卵后约30min后，可清晰地看 到第一极体已外排，位于卵壳膜和新形成的受精膜之间，并由于受精膜的举起而举起 (图1—3)。 排卵后约70min后，次级卵母细咆处于第二次减数分裂中期，可见孵化膜已初步形 成。孵化膜由受精膜及卵皮层分泌物等共同组成(图l一4)。而后，次级卵母细咆进入 减数第二次分裂后期，染色体开始分开。排卵后约1．5h，染色体已分开(图1．5)，分 出的外排染色体团将成为第二极体的核。排卵后约3h，可见第一极体和第二极体均已 外排，第一圾体位于孵化膜外，第二极体则位于孵化膜下(图1-6)。 2．雌雄原核的形成和结合 精子入卵后，精核发生了很大的变化，较小的精该转变为一松散的、较大的核物质 团即雄原核。雄原核形成早于雌原核。次级卵母细胞排出第二极体后，形成单涪体卵 子，其核称卵核，以后卵核转变为雌原核。雌、雄原按可借星光有无加以判别，较大 的、具有星光的为雄原核(图1—7)。雌、雄原俊形成后相向移动，彼此靠近。雌、雄 啜核通过联会方式形成合子核