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甲睾酮在四种反应体系中C12位脱氢反应的研讨.pdf

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墨誊琴了‘萌:’备F程I爱”’蘸。i莉1瘫~黼鬻骂 o£:’鬟=二二j^一一:I。:0j:。;.:.,i二.:一1;一:,二,i二:;二:;芝 甲睾酮在四种反应体系中0坦位 脱氢反应的研究 路福平 张艺 刘洪岩 天津科技大学生物工程学院 天津中盐制盐工程技术研究院 【摘要】霹曲 毙较筒单繁枵菌在薅糟夏应体系中摧化王7理一甲基一17§一羟基雄甾一4一烯一3一礁 (甲睾酮)斑成去氢甲睾酮的转化率。方法将甲睾酮投入四种反应体系中,即普通直接转仡、双液相转 化、原生质体转化和破碎细胞转化,通过高效液相法测定转化率。结果不同体系申甲睾酮C】.,2位脱氢转 纯率壹高剜低依次是普通直接转我、双液糖转讫、破碎舞胞转俄和原生鬟体转化,转化率分别舞59。翳、 35.2%、11.7鬈和8.7j|;。 【关键词】黄单葶籽菌;甲睾溺;01。2位脱氢;反应律系 微生物对甾体的转化作用不周于微生物的次 用于睾丸素缺乏症的补充治疗,也可用予子宫功能 缀代谢,它憝通过微生物体内的脱氢酶和电子转移 性密盘、再生障碍性贫血等,其Cl,2经脱氢产物去 酶系而发挥作用的。脱氢酶是胞内酶,亦是诱导酶。 进蛋自葳合成,掷制蛋壹质黪生,使食欲增进,胍 在钓世纪粥年代,3.甾黧Cl,2位脱氢酶(瑟国珏) E.C.1.3.994融从多种细菌中分离成功,这种脱氢酶肉增长,体重增加,临床用于慢性消化性疾病,骨 质疏松疫等,它与甲睾酮相比较,具有同化作用强, 是~种分子爨为56.62Kda的单~蛋白。其中以简 单节杆菌的Cl,2位脱氢效采最好。 雄性样作雳小的特点,丽置还可以俸为其它甾体激 素的原料中间体。 甲睾酮(Methyltestosterone)作为雄激素类药, 6* △1脱氢 ——————————-——-—————◆ 简单节杆菌 O 蘑1楚单节抒骜馕纯甲睾弱囊畿去氢甲睾酾 ·398· 2007年全国发酵行业高峰论坛 目前对于甲睾酮在不同反应体系中的转化研 加入4u/ml的青霉素溶液,8h后取培养液10ml, 究在国内外尚属空白。本文比较了普通直接转化法 和双液相转化法2种体系的转化率,并研究了细胞 洗涤两次,悬浮于6mlSMM中,加入溶菌酶处理, 壁与细胞膜对生物转化的影响,进行了原生质体转 镜检观察,当菌杆状多变为球状时离心,SMM洗 化与破碎细胞转化试验。 涤两次,重悬于该高渗液中,即得原生质体悬浮液, 1、材料和方法 投加0.5%底物和4%甲醇,转化条件同1.3.2。 1.1菌种 1.6破碎细胞的转化 简单节杆菌(Arthrobacter 1.94 simplex)AS 参考文献【9,10]操作。取生长至对数期末期的 为天津科技大学实验室保藏菌种。 1.2培养基 用1/15mol/L ph7.0的PBS缓冲液洗涤两次,重悬 1.2.1斜面培养基(%) 葡萄糖1,酵母膏1, 于6ml该缓冲液中,在冰浴条件下超声波处理菌悬 琼脂条2,PH7.0。

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