甲壳胺体内外抑菌试验及其抑菌机理的研讨.pdf

第27卷增刊 内 蒙古农业大学学报 Vol|2702S 2005年7月 2005 Jul ofInner Journal MongoliaAgricukuralUniversiTy 文章编号：1009—3575(2005】02S一0188—06 甲壳胺体内外抑菌试验及其抑菌机理的研究。 AND ANTIBACTERIALSUSCEPTIBILITYoFCHITOSANITS 刘思当。肖一红 (山东农业大学动科院，寨安271018) 摘要： 用二倍稀释法测定6种甲壳胺样品的最低抑菌浓度(MIC)，并根据MIC制作台有甲壳胺的普通琼脂培养 基和药敏试纸片。结果表明：1#、3#、4#、6#甲壳胺在一定浓度时对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、抄门氏菌、巴氏 杆菌均有不同的抑制作用，2#、5#在试验所用浓度下抑菌效果不明显。用与MIC相同鞭度配制的甲壳胺琼脂的 抑菌作用与试管MIC法相同，而甲壳胺试纸片则需要8个MIC才有抑菌作用。用电镜和光镜观察了3#甲壳胺对 大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抑菌机理。结果发现，无论是电镜样品还是光镜样品，加入甲壳胺的试管中的细菌 数目明显下降；细菌被甲壳胺粘附于一起。电镜观察发现细胞壁下 空隙明显增大，细胞器结构破坏并浓缩。 关键词： 甲壳胺：抑菌活性；MIC；抑菌机理 甲壳胺又称壳聚糖，是甲壳素脱乙酰基的产物，性质稳定，无毒…，具有良好的生物相容性，经改性后水 溶性增加，可被生物降解，并且具有一定的抑菌活性。甲壳紊广泛存在于自然界中，在虾、蟹及甲壳昆虫的壳 体中含量尤为丰富，是仅次于纤维素的第二大生物资源[2，3]，是取之不尽，用之不竭的海洋生物资源。甲壳 胺广泛应用于污水处理、食品、医疗、造纸、保鲜等许多领域应用[4，“，在应用过程中，其抑菌作用逐渐受到重 视。近年来，甲壳胺作为饲料的一种绿色添加剂已经被人们开始研究和接受。本试验主要研究证明水溶性 甲壳胺的抑菌作用，测定其最低抑菌浓度(MIC)，并进一步研究其抑菌机理。为甲壳胺在饲料添加剂和食品 保鲜中应用提供理论依据。 1材料与方法 1．1甲壳胺 000。 1．2试验菌种 (C79—20)、巴氏杆菌(分离株)，由山东农业大学动物科技学院传染病室提供。 1．3试验动物 120只1日龄SPF雏鸡 1．4培养基 普通营养琼脂平板、普通营养肉汤、血琼脂平板，按一般培养基制备的原则和要求制备。 1．s菌液的制备 用细菌计数法测定以每ml菌液中含有106CFU／ml细菌的菌液作为试验菌液【6】。 1．6甲壳胺溶液的制备 1．7最低抑菌浓度(MIC)的测定 +肇霎暑羿：2剂00思5当-0，6男-，2教0授．中国农业大学在读博士 增刊 刘思当等： 甲壳胺体内外抑菌试验及其抑菌机理的研究 189 浑浊程度，判定抑菌情况，取疑似有菌的试管溶液0．1m1接种于培养基中，培养24h后，观察是否有菌生长． 以无菌生长的培养基所对应的甲壳胺浓度为MIC[61。 1．8甲壳胺培养基的制备 胺克数，趁热加入到培养基中，溶解后再将培养基倒人灭菌的培养皿中，每个培养皿中加10ml左右(培养皿 培养基说明所加甲壳胺对其有抑制作用，如果有细菌生长说明所加甲壳胺浓度达不到抑菌浓度或没有抑菌 作用。 1．9 甲壳胺药敏试纸的制备 菌30min，置温箱中干燥备用。用无菌镊子将无菌滤纸加入到不同浓度的甲壳胺溶液中，放人冰箱中备 用[7l。 1．10甲壳胺抑菌机理的研究 1．10．1细菌培养先分别以平板划线法接种分离太肠杆菌和金