甲壳单糖和6OCMChitosan对大鼠胰岛细胞生长及胰岛素分泌量的影响研究.pdf

及胰岛素分泌量的影响 and Monosaccharjde TheEffectofChitin theInsulinSecretionofIsletCells onGrowthofIsletCellsand 刘万顺韩宝芹刘成圣王绪敏贺君刘晨光 (青岛海洋大学海洋生命学院。青岛，266003) 摘要本文通过胶原酶消化法获得大鼠胰岛单层细胞，并用转板以及碘乙酸处理的方法除去其中的 成纤维细胞，得到比较纯的胰岛内分泌细胞，以此为材科研究了甲壳单糖、不同分子量的CM．Chitosan 关性． ／1 飞 { x 、 壳聚糖是甲壳质的脱乙酰基产物，是一种聚氨基多糖。由于该多糖结构的特殊性，生物可降解性、 安全无毒和多功能性，已在农业、轻工业、医药、健康食品、医用功能材料、环保等领域得到广泛的 小鼠糖尿病模型中的血糖水平脚。为了在分子和细胞水平探讨Chitosan对胰岛细胞生长和胰岛素分泌的 胰岛素的方式，而是随培养的细胞量的增加而增加。 1实验部分 1．1材料、试剂及仪器 1．1．1材料一周龄健康Wistar大鼠幼鼠，购于青岛市药品检验所． 1．1．2主要试剂及配制 (1)氨基葡萄糖(Olucosamine)、N．乙酰氨基葡萄糖(N-Acetyl 实验室制备．用三蒸水配制成10mg／ml浓度，徽孔滤膜过滤除菌，低温冷藏备用． KD、30KD、75KD、154KD、 (2)不同分子量6-O-CM-Chitosan，本实验室制备纯化。用Mw为3．5 (3)细胞培养基：RPMI．1640(Gibo产品)。溶于800ml三蒸水中，加2．29Na2C03，调pH值为 7．2．7．4，加15％4,牛血清．(Hycloone产品)，过滤除菌，备用。 (4)D-Hanks液：称取NaCl 溶于800 124 20分钟)，4℃保存备用。 (5)0．05％EDTA--0．125％胰蛋白酶消化液：用三蒸水配制0．05％EDTA溶液200ml，再加入O．25 g 胰蛋白酶溶解，调pH值7．2，用0．2211m微孔滤膜滤菌，分装后一20℃保存备用。 (6)胰蛋白酶—胶原酶消化液：0．059胰蛋白酶(si鲫a)，0．0259 葡萄糖，溶于100 1．1 ml无c矿、M矿的o．01moF m微孔滤膜滤菌， LPBS(pH值为7．4)溶液，用o．22 分装后--20℃保存备用。 um微孔滤膜 滤菌，分装后--20℃避光保存备用。 (8)胎盼蓝：用D-Hank’s液配制，浓度为0．5％。 (9)碘乙酸：cP级，上海试剂二厂，用细胞培养基配成2．5 mg／ml的碘乙酸液，低温保存备用。 (10)胰岛素放射免疫试剂盒。北京北方生物技术研究所产品。 1．1．3主要仪器 医用净化工作台；C02培养箱：倒置显微镜：酶标仪：高速冷冻离心机；放射免疫 Y．计数器等。 1．2实验方法 1．2．1大鼠胰岛细胞的制备及培养嘲 中漂洗，用眼科剪