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甲醛脱氢酶研究进展 王海林高向阳 (华南农业大学生命科学院，广州510642 甲醛脱氢酶是中等含锌链醇脱氢酶家族的一个成员，存在于多种生物体中。本文 对其结构、制备、性质及在环保上的应用等方面的研究进展进行了综述。 1．2．1．1)是含锌介导的醇脱 甲醛脱氢酶(formaldehydedehydrogenase，FDH，EC ．氢酶家族的一个成员，广泛存在于多种生物体中【11。大多数的甲醛脱氢酶都需要 NAD+和谷胱甘肽参与甲醛的氧化，来自恶臭假单胞杆菌的甲醛脱氢酶(PFDH， EC1．2．1．46)是唯一的不需另外添加谷胱甘肽而依赖NAD+催化甲醛氧化的酶圆。 FDH可用于自来水、空气和纺织品中甲醛的检测，目前其开发前景越来越受到人 们的重视。 1．甲醛脱氢酶的结构 1994年，It0【3】等报道活化形式的PFDH是一个由相同亚基组成的同型四聚体， 每个亚基由398个氨基酸残基和两个锌离子(一个催化锌和一个结构锌)组成，其 相对分子量大约为42kDa。通过X．射线晶体衍射发现【4】，PFDH的亚基由两个组成， 1个 一个结构域与底物相结合，另一个结构域则与辅因子结合。催化结构域是由23 氨基酸残基组成，而辅因子结合结构域由167个氨基酸残基组成。催化结构域由氨 规则结构状态。其核心除含13结构外，还有5个分布在其外围的Q螺旋。经结构分 析证实PFDH每个亚基中都存在两个锌离子。锌离子与催化结构域的配基结合。辅 因子结合结构域由氨基酸残基17．1～173组成。中心区域的二级结构的基本元件为6 A～13 链平行的0片层结构(13 F)，并由两组3个Q螺旋构成夹心结构(一边是Q D，Q A，CIB和QC，另一边是Q E和Q B、QC、QE和Q F)侧面的6链平行B片层结构构成一个特有双核苷酸结合基元 D和Q E和QF之间。在其四级结构中，PFDH四 一个位于B E之间，另一个位于13 聚体由2个二聚体组成。二聚体通过它们相对于内部区域裂隙的表面相互作用，使 得四聚体的所有裂隙更易相互靠近。 2．甲醛脱氢酶的制备 从恶臭假单胞菌无细胞抽提液中，分离纯化了甲醛脱氢酶，得率为12％。同年， 脱氢酶。随后报道了从豌豆种子f91、拟南芥【lo】、玉米培养细胞【¨】中纯化得到了甲 醛脱氢酶。 114 图1 PFDH的亚基结构(引1刍Tanaka[4】) 3．甲醛脱氢酶的性质 7．8时活 Andot61等根据圆盘凝胶电泳判断，以甲醛为底物的甲醛脱氢酶在pH 性最大，该酶对乙醛、丙醛、乙二醛和丙酮醛也有活性，而酶活性显著地被Ni2+、 2J 等，通过甲醛脱氢酶反应与依赖四氢叶酸的反应或者甲醛脱氢酶反应与甲酸脱氢 酶反应相偶联，从而完全吸收甲醛。PFDH的活性可被邻二氮(杂)菲抑制Il引。通 50，000Da，该酶由两个亚基组成。动力 过凝胶过滤法测定PFDH的相对分子量为1 应是“乒乓”机制，伴随着化学计量NAD十的还原，反应是不可逆的。对不同种的 动物和植物来源的FDH，分别以S．羟甲基谷胱甘肽、谷胱甘肽、甲醛和NAD+的 为底物测得的‰值基本相刚14J。动物来源的FDH可以中等长度烃链醇类和60．羟 基脂肪酸作为替代底物，同时这些底物也能被玉米来源的FDH所利用。1996年， Sh响“8】等研究认为，甲醛脱氢酶是一种古老而保守的酶，对内源