番茄RAPD技术反应体系条件的优化研究.pdf

蔬菜361 番茄RAPD技术反应体系条件的优化 杨少军“3朱为民““ 扬晓锋“2 王 霞“3 薛林宝3 (1上海市设施园艺重点实验室，上海201106； 2上海农业科学院园艺研究所，上海201106；3扬州大学农学院园艺系，扬州225009) 摘 DNA聚合酶浓度，退火温度和循环次数进行了探讨，确立了适合番茄植物 dNTPs、Taq RAPD分析技术体系：在1．5％琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。结果为番茄植物遗传多样性 和分子系统学研究提供技术支持。 关键词：番茄；随机扩增的多态性(RAPD)}反应体系；优化 ofRandom DNA(RAPD)wasestablished Abstract：A AmplifiedPolymorphism protocol RAPD the fortomato．Themainfactors concentrationof influencingincluding M酽+，dNTPs， andthe were cycles investigated． Taqpolymerase，annealingtemperature words：tomato；random Key amplifiedpolymorphism system；optimization RAPD是rndomamplifiedpolymorphicDNA的简称，即随机扩增的多态性DNA，以检出DNA的 间比较短，但是由于其独到的检测DNA多态性的方式以及快速、简便的特点，使这一技术已经渗透于 基因组研究的各个领域。RAPD技术是建立在PCR技术基础之上的，利用随机的短的脱氧核苷酸序列 酰胺或琼脂糖凝胶进行电泳分离，经EB染色或放射自显影来检测扩增产物DNA片段的多态性，这些 引物的选择是十分关键而艰巨的工作，需要研究者对不同物种做大量的摸索工作，以确定每一物种的最 佳引物和实验条件。只有实验条件的标准化，才可能提高RAPD标记的再现性。本实验拟优化番茄 RAPD反应体系，为应用该技术进行番茄种质资源的研究及进行番茄分子标记辅助育种打下基础。 1材料与方法 1．1材料 实验采用的番茄材料由扬州大学园艺系和上海农业科学院园艺研究所提供，2004年8月定植于上海 收稿日期：2005—12—27)修回日期：2005—05—12。 基金项目：上海市农委科技兴农重点攻关项目[项目编号：沪农科攻字(2003)第2—2号]资助。 作者简历：杨少军：(1981一)，男，山东烟台人，硕士研究生，研究方向为蔬菜遗传育种及生物技术。 021 *通讯作者：E—mail：wrmhu69@hotmail．corD．}Telt 362园艺学进展【第七辑 农业科学院园艺场。 RAPD引物由上海生工生物技术有限公司合成。合成的部分引物编号及其序列见表1。 表1本实验所用部分合成的RAPD引物殛其序列 引物编号 序 列 引物编号 序 列 53 3TCGGAGCcTATT芎73 5CACCTTAAAGC， 55 5’GCCAGAGATGA， 125 5GCCAGATGAGA了 58 51GTGACTCOGAG罩158