柔嫩艾美耳球虫抗药性虫体纯化及mRNA差异显示的研究.pdf

柔嫩艾美耳球虫抗药性虫体纯化及mRNA差异显示的研究.pdf

  1. 1、本文档被系统程序自动判定探测到侵权嫌疑,本站暂时做下架处理。
  2. 2、如果您确认为侵权,可联系本站左侧在线QQ客服请求删除。我们会保证在24小时内做出处理,应急电话:400-050-0827。
  3. 3、此文档由网友上传,因疑似侵权的原因,本站不提供该文档下载,只提供部分内容试读。如果您是出版社/作者,看到后可认领文档,您也可以联系本站进行批量认领。
查看更多
柔嫩艾美耳球虫抗药性虫体纯化及mRNA差异显示的研究

中文摘要 球虫病是集约化的养鸡场危害晟火的疫病之一,目前其防治仍不能离开抗球虫药,但药物 饺州过程中不可避免的会产生抗药性.因此,我们选择抗药性这个球虫病防iff中的重要课题进行 研究.采_I{j玻璃纸法进行了柔嫩艾美耳球虫(Ei口eriatenella)的单卵囊感染车¨单孢子囊克隆, 采川过滤、离心分离和DE.52纤维索柱层析系列方法纯化了不同虫株球虫的裂殖子,对不同虫株 的裂殖子进行了mRNA差异显示,进行了实验室球虫抗药性分子检测方法的初步应用。 单卵囊纯化和单孢子囊克隆。JI=}j单卵囊感染技术,对柔嫩艾荚耳球虫卵囊进行了分离纯化, 实验室单卵囊感染26只鸡,饱和盐水漂浮集卵法进行检测,成功率达38%;首次采用单孢子囊克 隆技术,在国内对柔嫩艾美耳球虫进行了克隆,单孢子囊感染35只鸡,10只鸡感染成功,成功 率28.6%。结果获得了遗传上单一的上海马杜霉素敏感和抗药虫株,甘肃地克珠利敏感和抗药的 虫株,该单卵囊分离纯化和单孢子囊克隆技术简单易行。 不同虫株的裂殖子的分离纯化。12日龄的肉用雏鸡,感染1.5×103个卵囊,采用标准分样 筛过滤、离心分离和DEAE-52纤维素柱层析,纯化了2个敏感虫株和2个抗药虫株裂殖子,通 17×10’个,其中 7个,平均每只鸡获得裂殖子6 化,从30只鸡盲肠黏膜中纯化裂殖子1.85×lO 杂质极少,其纯度适用于mRNA差异显示等分子生物学研究.分别分离纯化了柔嫩艾美耳球虫马 杜霉素敏感虫株和抗药虫株5×105个裂殖子。 柔嫩艾美耳球虫敏感虫株和抗药虫株的mRN^差异显示。采用锚定引物和I随机引物,首次对 点杂交鉴定4个片段为阳性,对阳性克隆测序、同源性比较。来自于马杜霉素抗药虫株裂殖予的 线一5蛋白与虫体融解宿主细胞膜、入侵、运动和溢出有关,在第二代裂殖子时期,抗药性虫株该 序列发生转录,而在敏感虫株中沉默。HCDl序列米臼马杜霉索敏感虫株,该片段与柔嫩艾美耳球 86%,没有该表面抗原功能的报道。AGD5片段米白 虫表面抗原16和17序列同源性分别为83%雨1 抗药虫株,EA.D8—2序列来自敏感虫株。通过比较认定这两条序列为新序列,它们所代表的基lj司的 意义尚不清楚。 实验室球虫抗药性分子检测的初步研究。选择在敏感虫株中沉默,抗曲虫株中表达的特异 序列AGD5设计检测引物,采J{}j 1株地 够鉴别马杜霉素抗药虫株羊¨3株马杜霉素敏感虫株(2株对所有药物敏感的不同地理株t 克珠利抗药性虫株):此鉴定结果与鸡体试验的结果一致。说明敏感虫株羽I抗约虫株的在该序列 15杜霉索抗药性虫株。 的筹异发生在转录水平。以卵囊的总DNA为模板PcR方法却不能鉴别敏感雨l 关键词:柔嫩艾美耳球虫;抗药性;纯化:mRNA筹异显示。 Abstract isolation and ofEimeriatenellcL Singleoocyst singlesporneystcloning The infaecesof oocysts theehickenswereidentifiedunder aftersaturated sodiumchloride microscope solution floating.Oocyst was and the o

文档评论(0)

qiwqpu54 + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档