柞蚕核型多角体病毒两个基因功能初探.pdf

摘 要 我们以南阳云阳蚕厂的柞蚕为研究对象，首先从得脓病致死的柞蚕尸体中纯化 ApNPV的多角体，我们采用差速离心的方法，经过几轮洗涤离心后，得到了较为纯净 的沉淀，即为ApNPV的多角体。在电子显微镜下观察，ApNPV多角体多呈四角形。接 着我们对ApNPV多角体进行了切片并在透射电镜下观察，每个多角体中有多个核衣壳。 然后采用传统的方法，弱碱裂解上一步纯化的ApNPV的多角体，经过超速离心，得到 了ApNPV的病毒粒子，电镜下可以看到呈杆状的病毒粒子。 下了基础。经过对全基因组序列分析，发现在ApNPV基因中没有p35的同源基因，但 是有两个iap基因，／apl和iap2。由于并不是所有的iap基因都具有凋亡抑制的功能， 因此，我们本研究的重点是探索ApNPV的两个iap基因是否具有凋亡抑制的功能。第 一步是得到这两个基因，为此我们首先提取了ApNPV的基因组DNA，并以此为模板， ladder和流式细胞仪分析 plZTN5一His—Apiap2质粒的细胞都出现明显的凋亡现象，DNA 也得到了同样的结果。我们又做了标记拯救试验，将重组质粒分别转染Sf9细胞后，加 A 凋亡抑制基因，而Ap—iap2则不具有凋亡抑制功能。 B121宿主菌，并用含有 出两个基因，克隆到pET28b载体，用构建好的载体转化E．coli B121和没有质粒的E．coliB121作阴性对照。结果表明有重组质 pET28b空载体的。E．coli 粒的E．coli 没有出现正这两条带。为了鉴定此蛋白，我们用Ni2+亲和柱纯化融合蛋白，并用His 的研究打下了基础。 关键词：杆状病毒，细胞凋亡，柞蚕核型多角体病毒，IAP ABSTRACT tussahsilkwormfrom silkwormin Inthis wefoucsonthe Yunyang factory study isolatedand the of fromthesilkwormbodies Nanyang．First，wepurifiedpolyhedrosisApNPV differential and diedfrom themethodof centrifugation，aftercentrifugation ApNPV．Weadopt roundsof were ofthe several polyhcdrosispurified．Theshape waShmg,theApNPV wasobservedunder andelectron thenthe polyhedron microscope microscope．And Was theweakbase BV polyhedrosislysisedby buffer,after were purified． particles in Was onNCBlwebsite